使用精宏DHG-9140A优化青黛炮制条件

中药青黛是由马蓝 Baphicacanthus cusia (Nees) Bremek.、菘蓝 Isatis indigotica Fort.或蓼蓝 Polygonum tinctorium Ait.等植物制成的加工品，具 有清热解毒、凉血消斑、泻火定惊的功效。青黛 可用于治疗牛皮藓、溃疡性结肠炎[等炎症性 疾病，以及治疗慢性粒细胞性白血病。相关研 究表明，青黛中的靛玉红成分主要起抗肿瘤、抗 氧化作用，用于治疗慢性粒细胞性白血病；青 黛中的靛蓝成分主要起抗菌作用。

1 仪器与试剂 

高效液相色谱仪(安捷伦)；二极管阵列检测器 (日本日立公司)；BSA124S 型电子天平(赛多利斯 科学仪器北京有限公司，d=0.1 mg)；DK-S24 型电 热恒温水浴锅(上海森信实验仪器有限公司)； 精宏DHG-9140A 型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实 验设备有限公司)；L550 型台式低速大容量离心机 (湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；KQ3200DB 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；臭 氧发生器(10 g·h1 ，长沙畅青化工有限责任公司)。 马蓝Baphicacanthus cusia(Nees) Bremek.茎叶 (课题组种植)；纯水(双蒸水)；甲醇(色谱纯、西陇 科学股份有限公司)；N,N-二甲基甲酰胺(DMF，分 析纯，西陇科学股份有限公司)；靛玉红(含量： 98.36%；成都曼斯特生物科技有限公司)；靛蓝(含 量：98.09%；成都曼斯特生物科技有限公司)。 

2 方法与结果 

2.1 青黛 HPLC 方法学的建立

2.1.1 色谱条件 

色谱柱：依利特 YWG C18 (4.6 mm×200 mm，10 m)；流动相：甲醇-水(7∶ 3)；流速：1 mL·min1 ；检测波长：292 nm。 

2.1.2 对照品溶液的制备 

靛玉红：精密称取靛 玉红对照品 2.5 mg，置于 100 mL 量瓶中，加 DMF 约 80 mL，超声使其溶解，并用 DMF 定容，作为 靛玉红贮备液。 靛蓝：精密称取靛蓝对照品 5.0 mg，置于 50 mL 量瓶中，加 DMF 约 40 mL，超声使其溶解， 并用 DMF 定容，作为靛蓝贮备液。 

2.1.3 供试品溶液的制备 

精密称取样品 1.0 mg，置于 10 mL 量瓶中，加 DMF 约 8 mL， 超声 30 min 使其溶解，并用 DMF 定容，作为供 试品溶液。 

2.1.4 线性关系考察 

精密吸取 2，4，6，8，10 mL 靛玉红贮备液至 10 mL 量瓶中，加 DMF 稀释至刻 度，摇匀，即得浓度分别为 5，10，15，20，25 μg·mL1 的靛玉红溶液。 精密吸取 1，2，3，4，5 mL 靛蓝贮备液至 10 mL 量瓶中，加 DMF 稀释至刻度，摇匀，即得浓度分 别为 10，20，30，40，50 μg·mL1 的靛蓝溶液。 按“2.1.1”项下色谱条件，进样 10 μL，以靛 玉红、靛蓝溶液的浓度为横坐标(μg·mL1 )，峰面 积为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程分别为y 靛玉红=51.717x10.368，R2 =0.999 9；y 靛蓝=47.477x+ 80.102，R2 =0.999 6。 

2.1.5 仪器精密度试验 

取同一供试品溶液，按 “2.1.1”项下色谱条件，连续进样 5 次，其峰面 积的 RSD 分别为靛玉红 1.67%、靛蓝 1.35%。 2.1.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按 “2.1.1”项下色谱条件，在 0，2，4，8，12，24 h 分别精密量取 10 μL，进样测定，其峰面积的 RSD 分别为靛玉红 1.90%、靛蓝 1.69%。 2.1.7 重复性试验 取 5 份供试品溶液，按“2.1.1” 项下色谱条件进样测定，5 份供试品溶液的靛玉红 平均浓度为 8.21 μg·mL1 ，RSD=1.86%；5 份供试 品溶液的靛蓝平均浓度为 50.22 μg·mL1 ，RSD= 0.97%。

3 讨论 

青黛传统炮制方法中加入石灰打靛，将马蓝 叶中吲哚苷、靛红烷 B 等前体物质在碱性环境下 转化为靛蓝、靛玉红等有效成分，开发出 的新炮制工艺是通过酸水解和碱中和将前体物质 转化为靛蓝、靛玉红等有效成分，从而避免引入 石灰，使青黛产品品质得到提高。中国药典以靛 玉红、靛蓝作为青黛质量内控成分，分别以靛玉红、靛蓝含量为评价指标，量化工艺参 数，确定定向生成靛玉红、靛蓝的工艺路线，分 别考察了通 O3 时间、盐酸浓度、提取温度、提取 时间等因素对青黛炮制工艺的影响。在此基础上，通过 Box-Behnken 中心组合设计多因子响应面试 验研究分别建立定向生成靛玉红、靛蓝的炮制工 艺，采用非线性模型拟合，可信度较好，具有很 好的预测性，青黛的新炮制工艺也为青黛的炮制和综合利用提供了理论依据和技术参考。

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