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卵黄抗体的分析(上海精宏GNP-9270使用)

返回列表 来源:未知 发布日期:2020-03-26 13:55【

1 材料 


1. 1 疫苗与试验动物

鸡新城疫活疫苗( La Sota 株) ,购自哈药集团生 物疫苗有限公司; 鸡新城疫灭活疫苗( Ulster 2C 株) , 购自南京梅里亚动物保健有限公司; 美国王鸽( 约 1 000 只) ,淇县某鸽场提供; 健康罗斯公鸡( 2 kg 左 右) 2 只,市购。

1. 2 主要试剂

柠檬酸钠( 分析纯) ,购自天津市北辰方正试剂 厂; 氯化钠( 分析纯) ,购自天津市恒兴化学试剂制造 有限公司; 氯仿( 分析纯) ,购自洛阳昊华化学试剂有 限公司; 碘酊,购自德州欣瑞达消毒制品有限公司; 医 用乙醇,购自洛阳市洁康消毒剂厂。

1. 3 主要仪器

离心机( 型号为 80-2) ,购自上海手术器械厂; 移 液器( Research plus) ,购自德国 Eppendorf 股份有限 公司; 天平( 型号为 HC-C) ,购自慈溪市华徐衡器实 业有限公司; 超净工作台( 型号为 SW-CJ-2F) ,购自 苏州 净 化 设 备 有 限 公 司; 生 化 培 养 箱 ( 型 号 为 GNP-9270) ,购自上海精宏实验设备有限公司; 高压 蒸气灭菌器( 型号为 LDZX-30KAS) ,购自上海申安 医 疗 器 械 厂; 冰 箱 [型 号 为 BCD - 610 W( KA92NV02TI) ],购 自 波 西 化 电 器 ( 安 徽) 有 限 公司。


2 方法


淇县某鸽场美国王鸽( 约 1 000 只) 在 4 月龄时 用鸡新城疫灭活疫苗( Ulster 2C 株) 免疫,8 月龄时再 免疫 1 次,均为胸部肌肉注射,0. 4 mL /只,10 月龄时 进行样本采集。用 1 mL 无菌注射器从健康产蛋母鸽 翅静脉采集血液,每只鸽采集 1 份,共采集18 份, 0. 5~0. 8 mL /份,置于 1. 5 mL 无菌离心管中,做好标 记,4 ℃保存,备用。同时收集对应编号母鸽所产的 鸽蛋 18 枚,做相同编号标记,4 ℃保存,备用。在超净工作台中,用碘酊擦拭鸽蛋,再用乙醇脱 碘; 用无菌镊子敲破鸽蛋蛋壳,将蛋内容物置于灭菌 单层纱布( 呈漏斗状盖于一个灭菌烧杯上,用灭菌棉 线扎紧) 上,让蛋清慢慢流入烧杯; 收集卵黄,将其置 于另一个灭菌烧杯中,用灭菌玻璃棒充分打碎卵黄, 使卵 黄 呈 液 状。取 卵 黄 原 液 1 mL 置 于 灭 菌 的 1. 5 mL 离心管中; 另取 1 mL 卵黄原液置于灭菌的 15 mL 离心管中。卵黄原液和卵黄抗体提取液均-20 ℃ 保存,备用。


3 结果与分析


制备的血清样品呈黄色,黏 稠度高于提取的卵黄液,但远低于卵黄原液,易于吸 取; 提取的卵黄液透明、清亮,非 常稀薄,容易吸取; 卵黄原液呈深黄色,非常黏稠,不太容易吸取,吸取时吸头外常有 卵黄原液残留。






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