恒温干燥箱大鼠治疗机制研究的作用

电子天平（北京赛多利斯仪器有限公 司）、KDC-16HR 高速低温离心机（科大创新股份有 限公司）、202-1 型电热恒温干燥箱（天津市泰斯特仪 器有限公司）、CX41 光学显微镜（日本 OLYMPUS 公 司）、JEM-1220 型透射电镜（日本电子有限公司）、 HPIAS-1000 高清晰度彩色病理图文分析系统（武汉同 济医科大学千屏影像工程公司）。352 型酶标仪（芬兰 Labsystems Multiskan MS）、AC8 洗板机（芬兰 Thermo Labsystems）、电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）、超纯水仪（美国 Millipore，Milli-Q）、 凝胶成像仪（上海天能科技有限公司 Tanon-2500）、 垂直电泳仪及转膜系统（美国 Bio-Rad 公司）、高速 低温离心机（德国 Sigma-3-18K）、精密天平（瑞士 Mettler-Toledo，AB265-S）、DU-460 紫外分光光度仪 （美国 Beckman 公司）、实时荧光定量 PCR（美国 Bio-Rad 公司 CFX96）。水合氯醛（上海山浦化工有 限公司，批号 160209）、乌拉坦（上海山浦化工有限 公司，批号 151220）。肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）、 IFN-β 酶联免疫试剂盒购自南京建成生物工程研究所有 限公司，TGF-β1、 TNF-α 一抗购自北京博奥森生物技 术有限公司。总 RNA 提取试剂 Trizol，反转录试剂盒 （大连宝生物有限公司），SYBR Green 荧光定量 PCR 试剂盒（HaiGene, A2201），超敏ECL发光液（HaiGene， M2301）。兔抗人，鼠 TLR2 多克隆抗体（武汉博士 德生物技术有限公司），羊抗兔 HRP 标记二抗（金斯瑞，A00098）。引物由大连宝生物有限公司合成，其 他试剂均为国产分析纯。膈下逐瘀汤加减方（GD）： 赤芍 10 g，牡丹皮 5 g，桃仁 5 g，川芎 5 g，枳壳 5 g， 延胡索 10 g，香附 10 g，乌药 5 g，地龙 5 g，鳖甲 5 g。 （由黑龙江中医药大学中草药房提供）。康妇炎胶囊 （山东步长神州制药有限公司，150530，服用方法：1 次 3 粒，1 d 2 次）。雌性 SD 大鼠，SPF 级，8 ～ 12 周， 体质量（200±20）g，由黑龙江中医药大学实验动物 中心提供，许可证编号：SCXK（黑）2015-004。保持 饲养环境温度 22 ℃，相对湿度 40% 左右，标准大鼠 饲料喂养，自由饮水，适应环境 1 周之后开始实验。

将 35 g 牛肉汤培养基加入 到 1 000 mL 的蒸馏水中溶解，分别培养在 5 个锥形瓶 中，每瓶加玻璃球 30 个，121 ℃灭菌 20 min，放冷， 取斜面保存的金黄色葡萄球菌菌种，用无菌蒸馏水溶 解，在超净工作台下接种至新配制的液体培养基中， 于 28 ℃，110 r/min，摇床培养 24 ～ 48 h，得到菌液即 可使用。

雌性 SD 大鼠，104 只，随 机分为 8 组，分别为空白组（K）、手术组（S）、 模型组（M）、复合模型组（F），中成药组（C）， 中药低、中、高剂量组（D、Z、G），每组 13 只。 于实验第 1 天，除 K 组外，其余各组以 10% 水合氯 醛按 0.04 mL/kg 腹腔注射麻醉后，将大鼠侧卧式平放， 剃毛并用碘伏进行消毒，取肋缘过肾区 0.5 cm 近脊柱 侧旁开 1 cm 长的横切口，打开腹腔，拨开其他组织， 暴露一侧卵巢、输卵管及部分子宫，M 组、F 组均向 输卵管方向注入已配好的 4×109 /mL 金黄色葡萄球菌 悬液 0.1 mL，后逐层缝合腹壁肌层、皮肤，再以 75% 的乙醇消毒切口，另一侧输卵管同样方法操作，S 组 只手术不注菌，注入等剂量生理盐水。于实验第 8 天，复合模型组（F）给予大鼠不可预知的 慢性长期刺激，包括大鼠足底 25 ～ 35 V 的电击刺激， 每隔 8 ～ 15 min 进行 1 次，每次 60 ～ 120 s，持续 10 ～ 12 h；频率为 5 ～ 15 KHz 的噪声刺激（等级为 3 级），每隔 8 ～ 15 min 进行 1 次，每次 60 ～ 120 s， 持续 10 ～ 12 h；频率为 1 ～ 3KHz 强度的闪烁光刺 激，每隔 8 ～ 15 min 进行 1 次，每次 60 ～ 120 s，持 续 10 ～ 12 h；夹尾每小时 1 次，每次 4 min，8 次 /d； 45°倾斜鼠笼 2 h，每日 1 次；连续 21 d。

与空白组相比，模型及复合模型组的 IFN-β、TNF-α 表达提升均极度显著（P ＜ 0.01），说 明慢性输卵管炎大鼠造模成功；与模型组相比，复合 模型组提升亦显著（P ＜ 0.05），说明气滞血瘀型慢 性输卵管炎大鼠造模成功，并优于单独注菌造模；与 复合模型组相比，中药低剂量组有所降低（P ＜0.05）， 中药中、高剂量组表现为极显著性降低（P ＜ 0.01）， 中药低、中、高剂量组较复合模型组均有下降趋势。 2.2 气滞血瘀型慢性输卵管炎模型大鼠 TNF-α、 TGF-β1 表达。

慢性输卵管炎作为输卵管性不孕症以及异位妊娠 的重要因素，对女性的生殖健康具有重要意义。现如 今西医对其的治疗以抗生素为主，但仅对急性期效果 显著。而中药学在本病的非急性期则体现出了其独有 的优势，且经现代药理研究表明，膈下逐瘀汤加减方 中各药物可起到活血化瘀、抗菌消炎、提高免疫力以 及改善微循环等作用 ，同时可降低临床不适症状和 复发率。



 

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