珠子草药材质量标准及HPLC指纹图谱研究

珠子草 Phyllanthus niruri Linn.为大戟科叶下珠 属植物，又名月下珠、小返魂、霸贝菜，全草入药， 是印度与我国的传统民间草药，具有平肝清热、利水 解毒功效，临床用于治疗肝炎、肠炎、尿路感染、无 名肿痛及糖尿病等。研究显示，珠子草主要活性 成分为多酚类及木脂素类，其中多酚类包括柯里拉 京、没食子酸和鞣花酸等。迄今对珠子草药材的 基础研究主要集中在化学成分、药理作用及机制方 面，临床研究主要集中在抗乙肝病毒、改善肝功能和 抗肝细胞纤维化等方面，而针对珠子草有效成分 含量、质量综合评价与控制的研究相对较少，限制了 珠子草药材的应用和开发。珠子草曾收载于地方标准 2005 年版《云南省中药材标准》，只有简单的性状描 述等，质量标准不完善。为了更好开发利用珠子草， 合理评价和控制该药材的质量，对其质量标准进行提 高和系统性研究尤为必要。

美国 Agilent 1260 高效液相色谱仪（四元梯度泵， DAD 检测器，OpenLAB 色谱工作站），电子分析天平（赛多利斯电子天平），KH-100E 超声波提取器（昆山禾创超声仪器有限公司），BX51 生物显微镜（日本 Olympus 公司），电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），TDW 箱式电 阻炉（上海东星建材试验有限公司），XMTD-204 恒温水浴锅（江苏新康医疗器械有限公司）。 短叶苏木酚对照品（德尔塔林试剂公司，批号 18490-0805，纯度≥98%），柯里拉京对照品（中国食 品药品检定研究院，批号 111623-200302，纯度≥ 98%），鞣花酸对照品（天津一方科技有限公司，批 号 00597，纯度≥97%），珠子草对照药材（中国食品 药品检定研究院，批号 121319-200301），乙醇（分析 纯，天津市红岩化学试剂厂），盐酸（分析纯，北京 化工厂），磷酸（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有 限公司），乙腈（色谱纯，山东禹王实业有限公司化 工分公司），甲醇（色谱纯，深圳西陇化工股份有限 公司），薄层硅胶 G 板（青岛海洋化工集团公司），水为超纯水，其他试剂均为分析纯，无灰滤纸（杭州特 种纸业有限公司）。10 个不同产地珠子草药材样品来 源见表 1，经西北师范大学王庆瑞教授鉴定为大戟科 叶下珠属植物珠子草 Phyllanthus niruri Linn.的全草。

本品长短不一，高 20～70 cm，根外表棕色至红 棕色，直径 2～6 mm，有纵纹，质硬、脆易折，折断 面棕色至灰绿色；主根不发达，须根多数，浅灰棕色。 茎圆柱形，略带褐红色，直径 1～4.5 mm，有纵皱纹， 体轻，质脆，易折断，断面灰绿色，髓部中空。单叶 互生，叶片纸质，长圆形，长约 4～10 mm，宽约 2～ 4.5 mm，叶柄极短，托叶披针形。花细小，腋生于叶 背之下。蒴果扁圆形或略呈圆三角形，直径 1～1.5 cm， 红褐色，平滑无毛，轴柱及花萼均宿存；种子 6 枚， 三角状卵形，淡黄色或灰黄色，背侧为上下纵纹，侧 面为同心圆状纹理。以叶多、青绿色者为佳。气微香， 味苦。

根横切面：表皮为 3～4 列长方形细胞，切向排 列。皮层较宽，少有裂隙，由数列疏松的薄壁细胞组 成。韧皮部狭窄，呈环带状，韧皮射线不明显，筛管 散列，内含黄棕色分泌物。形成层呈环状，为一列扁 平细胞。初生木质部导管较集中，次生导管稀疏略呈 放射状排列，射线细胞 1～2 列径向延长，导管多角 形，直径 8.4～39.0 µm。木质部宽广，木射线密集， 由 1～2 列细胞组成，射线间嵌有导管、木纤维及木 薄壁细胞，导管单个或 2～7 个径向相聚成群、呈放 射状排列，外侧常有木纤维嵌于导管群间，薄壁细胞 含淀粉粒。 茎横切面：表皮 3～4 列细胞，类方形，常脱落。 皮层 5～7 列类圆形、矩圆形细胞，排列较疏松。韧皮部约 6 列类圆形、类多角形细胞，筛管内充满分泌 物。形成层为一列小型细胞，环状排列。木质部宽广， 导管稀疏，木射线明显。薄壁细胞呈环状分布，木质 部纤维发达，壁极厚，胞腔狭小。射线细密，1～3 列长方形细胞径向延长。髓部薄壁细胞类圆形，排列 疏松，髓中央常呈空腔。 粉末特征：全草粉末灰绿色，味苦。木纤维常成 束，黄色或淡黄色，断端平截或纵成帚状，直径 7.8～ 18.2 µm，长 80.6～447.2 µm。草酸钙簇晶散在或存在 于叶肉组织中，直径 10.4～28.6 µm；草酸钙方晶众 多，不规则，呈四面体、锥形、斧形等，直径 5.2～ 26 µm。叶上下表皮细胞多角形，周壁弯曲，下表皮 气孔密集，气孔不定式或不等式，副卫细胞 3～4 个。 淀粉粒单粒，稀复粒，类圆形，脐点裂缝状、人字状 等，大小不一，直径 5.2～18.2 µm 。

本研究分别从性状、鉴别、检查和浸出物、含量 测定四方面对珠子草药材的质量标准进行研究，所建 立的珠子草薄层色谱定性鉴别和指标成分（短叶苏木 酚、柯里拉京和鞣花酸）含量 HPLC 同时测定方法操 作简便、重复性好、专属性强，可用于该药材的质量 控制和评价。 本研究以 10 个不同产地珠子草药材为对象，建 立了珠子草 HPLC 指纹图谱，确定了 8 个共有峰，以 对照品色谱图指认了其中 2 个色谱峰，分别为短叶苏 木酚和柯里拉京。相似度评价结果表明，不同产地珠 子草药材中化学成分存在的差异性与其产地具有一 定的相关性。

主成分分析作为一种无监督模式识别法，利用降 维思想，将多个变量简化为几个综合变量，最大限度 保留原样本集所含的原始信息，建立的新变量为原变 量的线性组合，寻求主成分，以达到数据的压缩和解 释目的。不同产地珠子草中化学成分组成及含量存 在一定差异，主成分分析结果与样品地理分布结果吻 合度较高，且与 HPLC 指纹图谱相似度评价结果及薄 层鉴别结果也较为相似，能够反映出不同产地珠子草 化学成分的差异性和相似性。此外，在所识别筛选出 的6个用于区别产地差异的特征性物质中指认柯里拉 京，初步推测其可作为区别产地差异的特征性物质。 从本研究结果可以初步得出，不同产地珠子草中化学 成分与其所在产地具有相关性，其原因可能与产地的 气候、土壤等环境条件有关，具体还需进一步研究。

总之，本研究建立了同时测定珠子草中短叶苏木 酚、柯里拉京和鞣花酸的 HPLC 方法，对不同产地珠 子草样品进行测定。通过对测定结果进一步对比研究 发现，不同产地珠子草中短叶苏木酚、柯里拉京和鞣 花酸的含量差异较大，有同一省份珠子草中上述 3 种 成分含量较为相似者，如 1 号和 4 号（云南景洪和云 南个旧）；也有地理位置较为相近但 3 种成分含量差异较大者，如 6 号和 7 号样品（甘肃省陇南市武都和 陈县），以及 4 号和 5 号样品（云南个旧与云南蛮耗）。 这一研究结果与主成分分析结果较为相似，从而进一 步论证了化学模式识别技术（如主成分分析）可用于 区别珠子草的来源（产地）。 本研究补充完善并拟定了珠子草质量标准草案， 利用常规指纹图谱数据分析方法结合主成分分析对 不同产地珠子草药材进行评价，可为建立珠子草药材 整体性质量评价体系提供基础和依据。