随着社会、经济的发展，氮元素通过各种途径进人水体，成为水体主要污染元素
［１］。水体中氮含量过高会导致水体富营养化
［２］，破坏水生态系统。水体脱氮方法主要有物理、化学和生物方法。生物脱氮因其具有高效、经济和无二次污染等优点，应用广泛
［３］。目前，生物脱氮研究的热点主要是异养硝化－好氧反硝化脱氮。该法相比传统生物脱氮具有以下优势：
１）在好氧条件下能同时进行硝化和反硝化作用
［５］，提高了经济效益；２）硝化作用消耗的碱度可由反硝化作用产生的０Ｈ补偿，维持系统ｐＨ稳定
［６］；３）能直接利用水体中的有机碳作为脱氮所需碳源，脱氮同时降低ｃ〇Ｄ［７］等。正是由于这些优势，异养硝化－好氧反硝化菌具有具有广阔的应用前景。本研究利用溴百里酚培养基从环境中初筛出７株好氧反硝化菌，然后以Ｎ０３－Ｎ为唯一氮源进行复筛，从中优选出一株异养硝化＿好氧反硝菌株Ｆ２，通过１６ｓＲＮＡ分子鉴定法对Ｆ２进行种属鉴定。再分别以Ｎ０３－Ｎ、Ｎ０２－Ｎ、ＮＨ：－Ｎ为唯一氮源培养菌株Ｆ２，考察菌株Ｆ２在不同好氧反硝化体系中对氮源的降解效率。基于硝化－反硝化的主要发生场所，各菌种分别取自广州市沥滘污水处理厂曝气池活性污泥、广州市东山湖湖底沉积物、深圳市坪山垃圾填埋场垃圾渗滤液。取３个２５０ｍＬ锥形瓶，每个瓶中加人１００ｍＬ富集培养基及若干玻璃珠，灭菌，再分别向每个瓶中移人５ｍＬ沉积物、活性污泥、渗滤液。置于３０°Ｃ，１５０ｒ／ｍｍ的恒温摇床中振荡培养５ｄ，每隔２４ｈ向富集培养液中加人１ｍＬ５％ＮａＮ０３溶液和１ｍＬ５％（ＮＨ４）２Ｓ０４溶液，做３个平行样。培养完成后，将富集培养液在无菌操作台中进行梯度稀释。选择合适稀释倍数（１０５、１〇６、１〇７）的菌悬液，取１ｍＬ均勻涂布于ＢＴＢ培养基上，置于３０°Ｃ的
恒温培养箱中培养１￣２ｄ，每个梯度做三组平行样。将周围长有蓝色晕圈或变蓝的菌落挑出在ＬＢ固体培养基上划线，将划线后的培养基放人３０°Ｃ的恒温培养箱中培养１￣２ｄ，对长出的菌落再次进行平板划线，重复平板划线多次以得到纯菌。将分离得到的纯菌株接种到ＬＢ斜面培养基，４°Ｃ保存。将菌株革兰氏染色，置于光学显微镜下观察，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。具体步骤如下：１）在经酒精消毒的载玻片上滴加一滴蒸馏水，用接种环挑取适量菌苔均勻涂布于水滴中；２）将载玻片置于酒精灯上方烘干，通过火焰２￣３次，使细菌固定于载玻片上；３）向载玻片上的细菌固定处滴加结晶紫溶液进行初染，静置约１分钟，用蒸馏水洗净；４）滴加碘液进行煤染，并静置约１ｍｍ，水洗后并用滤纸吸干；５）使用９５％的酒精进行流滴脱色，时间大约为２０￣３０ｓ，接着立即用水冲净；６）最后使用蕃红溶液进行复染３￣５ｍｍ，之后用水冲净，待载玻片干燥；７）使用油镜进行镜检。
