荷青花全草有机成分的鉴定（精宏DHG-9030A使用）

荷青花〔Hylomecon japonica（Thunb.） Prantl et Kundig（Papaveraceae）〕为罂粟科荷青花属植物，多年 生早春类短命植物，分布于我国东北至华中、华东地区。 荷青花全草具有祛风除湿、舒筋活血、消肿止痛等功效。 目前文献中有关荷青花全草的化学成分仅为生物碱 类、酚类、皂苷类等化合物。

1 材料、仪器与试剂 

1.1 试验材料 

荷青花全草于 2015 年 6~8 月采自吉林省双阳市， 经洗涤、干燥后保存于实验室，备用，经吉林大学药学 院生药学教研室张静敏教授鉴定为荷青花〔H．japonica（Thunb.）Prantl et Kundig（Papaveraceae）〕。

1.2 仪器与试剂 

Varian UNITYINOVA2400核磁共振仪（BRUKER 公司）；LDI1700-TOF-MS激光解吸电离飞行时间质谱 仪（惠普公司）；LC-10AT高效液相色谱仪（岛津公司）； SHB-IIIA循环水式多用真空泵（上海豫康科教仪器有 限责任公司）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化 仪器有限责任公司）；精宏DHG-9030A 电热恒温鼓风干燥 箱（上海精宏公司）；KQ-250B 型超声波清洗器（昆山 市超声仪器有限公司）；D-101 吸附型大孔树脂（天津 农药股份有限公司树脂分公司）；薄层色谱硅胶 GF254 （青岛海洋化工厂）；柱色谱硅胶（青岛恒泽硅胶制品有限 公司）；所用试剂均为分析纯（北京化工集团有限公司）。 

2 提取与分离 

2.1 浸提 

干燥的荷青花全草，经 70%乙醇浸提，过滤，旋转 蒸发器浓缩后得到提取物浸膏，备用。 

2.2 洗脱 

将浓缩得到的提取物浸膏上样于预处理过的 D101 大孔吸附树脂柱并进行梯度洗脱，洗脱剂条件为 乙醇（0%、10%、30%、50%、70%、95%），薄层色谱监测发 现，10%乙醇洗脱效果较好，故收集得到 10%乙醇洗脱 物。 

2.3 分离 

将10%乙醇洗脱物反复进行硅胶柱色谱分离，展开剂 条件为氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水（1.5∶1.8∶4.0∶1.0）， 分离 4 次得到A、B、C、D 4 个组分，将 4 个组分经薄层 色谱与硅胶柱色谱多次分离。薄层色谱展开剂条件为 氯 仿∶ 甲 醇∶ 乙 酸 乙 酯∶ 水∶ 甲 酸 （1.5∶3.5∶4.0∶0.5∶0.5），硅胶柱色谱展开剂条件为 氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水（1.5∶2.5∶4.0∶1.0），最 终得 A1、B1、C2、C4、D1 和 D2 6 个组分。 

2.4 纯化

 将分离得到的 6 个组分经高效液相色谱纯化，色 谱条件为色谱柱：Gemini 5 m C1（8 250 10 mm）；检测 波长：254 nm；流速：3.0 mL/min；进样量：50 L；柱温： 25 ℃；流动相：乙腈（A）与 0.1%甲酸（B）。洗脱条件 （A1、B1：0~9.00 min CB 97%，9.01~30.00 min CB 97%~90%；C2：0~30.00 min CB 85%~70%；C4： 0~13.00min CB 76%；D1、D2：0~10.00min CB72%），分 别得到化合物 1~7。 

3 结构鉴定 

3.1 化合物 1

室温下为白色粉末，易溶于甲醇，10%硫酸-乙醇 加热显色为黄色，Molish 反应阳性，说明该结构连有 糖基。HR TOF-MS m/z：[M+Na]+ 443.1144，结合 13CNMR、1H-NMR 得出分子式为 C17H24O12。1H-NMR （400MHz, DMSO-d6） ：8.14（1H, d, J=5.6Hz, H-6）， 6.44（1H, d, J=5.6Hz, H-5），2.50（1H, s, H-7），4.70（1H, d, J=7.6Hz, H-1'），3.57（2H, d, J=9.2Hz, H-6'），3.28（m, H-3'），3.32（m, H-5'），3.39（m, H-2'），3.42（m, H-4'）， 4.81（1H, d, J=2.8, H-1''），3.81（1H, d, J=2.2Hz, H-2''）， 4.24（1H, t, J=12.8Hz, H-4''），3.57（2H, s, H-5''）；13CNMR（100MHz, DMSO-d6） ：15.1（-CH3），174.2 （C-4），161.5（C-2），155.8（C-6），141.7（C-3），116.1 （C-5），109.1（C-1''），103.6（C-1'），78.8（C-3''），76.2 （C-2''），75.8（C-4''），63.2（C-5''），75.8（C-3'），73.7 （C-5'），73.2（C-2'），69.8（C-4'），67.4（C-6'）。上述信号 归属是通过 HMQC、H-H COSY、HMBC 二维核磁共 振谱完成的。以上理化常数、质谱数据、1H-NMR、13CNMR数据与一致，故化合物 1 鉴定为麦芽醇-6' -O- -D-呋喃芹糖基- -D-吡喃葡萄糖苷（maltol-6'-O- - D-apiofuranosyl-glucop-yranoside）。

3.2 化合物 2 

室温下为黄色油状物，易溶于甲醇，10%硫酸-乙 醇加热显色为红棕色，三氯化铁反应阳性，说明该结构 为酚类化合物。1H-NMR（400MHz,DMSO-D6） ：7.73 （2H, m, H-3'），7.69（2H, m, H-4', H-6'），7.65（1H, m, H-5'），4.24（1H, dt, J=6.4Hz, H-1），4.14（1H, dt, J=6.4Hz, H-2'），2.51（1H, m, H-3），1.67（1H, m, J=6.8Hz, H-7），1.42（2H, m, J=15.2Hz, H-2），1.31（4H, m, J=12Hz, H-4, H-5），1.23（2H, m, J=13.2Hz, H-6）， 0.93（3H, d, J=7.2Hz, H-8），0.89（3H, d, J=7.4Hz, H-9）， 0.86（3H, t, J=5.1Hz, H-10）；13C-NMR （100MHz, DMSO-d6）：167.0（C-1'），131.7（C-2'），131.6（C-3'）， 131.5（C-7'），128.6（C-4', C-5', C-6'），67.4（C-1），38.1 （C-3），30.0（C-7），29.8（C-4），28.3（C-2），23.2（C-5）， 22.4（C-6），13.9（C-9），13.5（C-8），10.8（C-10）。1HNMR、13C-NMR，故鉴定化合物 2 为 3,7-二甲基-正辛基-1-苯甲酸（3,7-dimenthyl-n-octan-1-ethyl benzoate）。

4 结果与讨论 

运用醇提法对采集自吉林省长春市双阳区 的荷青花全草植物进行了处理，采用多种色谱分离技 术对荷青花全草植物提取物进行分离得到了 7 个化合 物，结合每个化合物的理化常数、质谱数据、1H-NMR、 13C-NMR数据，最终得到 7 个单体化 合物，分别为麦芽醇-6'-O- -D-呋喃芹糖基- -D-吡喃葡 萄糖苷（1）、3,7-二甲基-正辛基-1-苯甲酸（2）、苯甲酸丁 酯（3）、苯甲酸乙酯（4）、香草酸（5）、香草酸甲酯（6）、咖 啡酸-1-O- -L-呋喃阿拉伯糖苷（7）。1~7 化合物均是 首次从荷青花全草植物中分离得到，其中化合物 1 为 罂粟科中首次分离得到。本试验的结果为进一步探究 该植物的药理作用提供了科学依据，为荷青花的化学 成分和药理活性提供了一定的参考。

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