总黄酮含量测定及不确定度评定

试验样品在制备、测量过程中，通常会因操作或者 测量用具等原因而不可避免的产生误差，因此多数测 量值只能反映出真实值的近似值。不确定度是合理的 表征赋予被 测 量 值 的 分 散 性 与 测 量 结 果 相 关 联 的 参 数，是 一种科学、合理的质量控制 方法和验证手段，能够较为准确的评估测量结果。

仪器与试药

１ 仪 器

ＡＥ２４０分析天平（梅特勒－托利多公司），ＤＫ－Ｓ２６电 热 恒 温 水 浴 锅（上海精宏实验设备有限公司），ＵＶ－２５５０紫外分光光度计（日本岛津公司）， 玻璃器皿为天玻牌 Ａ 级。

２ 试 剂 与 试 药

柴 胡 利 胆 颗 粒 （自 制，批 号 １８０３２０，１８０３２６，１８０４０９），黄芩苷对照品（中国药品生物 制品 检 定 所，批 号１１０７１５－２００５１４，含 量 测 定 用），乙 醇 （上海沃凯生物技术有限公司，分析纯），无水乙醇（广东 翁江化学试剂有限公司，分析纯），纯化水（自制）。

方法与结果

１ 溶液的制备

１．１ 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品 １０．４７ｍｇ，以无水乙醇定容于５０ｍｌ容量瓶中，再精密 量取５ｍｌ至１０ｍｌ容量瓶中，加无水乙醇至刻度线， 摇匀，即得。

１．２ 供试品溶液的制备

取 本 品１８．７３１５ｇ，精 密 加入７０％乙醇５０ｍｌ，热回流提取３次，每次１ｈ，收集 提取液，过滤，合并，蒸干，用无水乙醇溶解，定容于５０ ｍｌ容量瓶中，加无水乙醇定容至刻 度 线，摇 匀 后 精 密 移取５～５０ｍｌ容量瓶中，加无水乙醇至刻度线，摇匀， 即得。

１．３ 阴 性 样 品 溶 液 的 制 备

取 用 黄 芩 阴 性 样 品 １８．８７３４ｇ，照“１．２ 供试品溶液的制备”法，制备阴性样 品溶液，备用。

２ 检测波长选择

分别取对照品溶液、供试品溶 液和阴性样品溶液，在２００～４００ｎｍ 范围进行紫外全 波长扫描，结果显示，黄芩苷对照品溶液与供试品溶液 光谱图基本一致，且阴性无干扰，最终选择检测波长为 ２７８ｎｍ。

３ 线性及线性范围的考察

精密吸取对照品溶 液１．０、２．０、４．０、６．０、８．０ｍｌ，分别置于１０ｍｌ容量瓶中， 加无水乙醇稀释到刻度，摇匀，分别取上述溶液，采用 ＵＶ－Ｖｉｓ进行测定，以吸光度 Ａ（Ｙ）为 纵 坐 标，黄 芩 苷 浓度（ｍｇ／ｍｌ）（Ｘ）为横坐标绘制标准曲线。

４ 方法学验证

４．１ 精密度和重复性试验

精 密 吸 取“１．２”项 下 供试品，在２７８ｎｍ 波 长 下，连 续 测 定５次，其 吸 光 度 的 ＲＳＤ％＝０．６４％，表明精密度良好。

４．２ 稳定性试验

精密吸取“１．２”项下供试品，在 ２７８ｎｍ 波长下，分别于０、１、３、６、９、１２ｈ测定，测定６ 次，其吸光度的 ＲＳＤ％＝０．７７％，表 明 溶 液 在１２ｈ内 的稳定性良好。

４．３ 重现性试验

取同一批次的柴胡利胆颗粒５ 份，分别按“１．２”项下平行制备 供 试 品 溶 液，依 法 进 行 测定，结果 ＲＳＤ％＝１．２６％，表明样品重现性良好。

４．４ 回收率试验

精密称取已知含量的供试品５份，分别精密加入黄芩苷对照品，照“１．２”项 下 制 备 供 试品溶液，依法测定其中总黄酮含量。

讨 论

不确定度的评定，与方法学验证一样，将成为分 析领域的重点和难点，２０２０年版药典拟增加《药品检 测结果的不确定度评定指导原则》的 征 求 意 见 稿， 可见不确定度评定越来越受重视。