蒲公英中绿原酸酶法提取工艺研究

蒲公英 （拉丁学名 Taraxacum mongolicum Hand.- Mazz.） 菊科，蒲公英属多年生草本植物。根呈圆锥 状，表面棕褐色，皱缩，叶边缘有波状齿或羽状深裂， 基部渐狭成叶柄，叶柄及主脉常带红紫色，花葶上部 为紫红色，密被蛛丝状白色长柔毛；头状花序，总苞 钟状，瘦果暗褐色，长冠毛白色，花果期为 4 月— 10 月。根据我国植物志记载，蒲公英属有 2 000 多 种，在中国分布有 70 多种，广泛分布于东北、华 北、华中、西北和西南的各省区。

1 材料与方法

1.1 主要材料

蒲公英、圣女果、纤维素酶、绿原酸标准品、 95%乙醇、氢氧化钠、抗坏血酸、酚酞，实验室提供。

1.2 主要仪器

数显恒温水浴锅，金坛市医疗仪器厂产品；旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂产品；分析天平， 上海越平科学仪器有限公司产品；电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司产品；台式高速 离心机，长沙湘智离心机仪器公司产品。

1.3 试验方法

1.3.1 蒲公英绿原酸提取工艺流程

制样→加纤维素酶混合→水浴→灭酶→过滤→ 减压浓缩→定容→分光光度法。

1.3.2 操作要点

（1） 制样。在低温的条件下，烘干粉碎蒲公英。 然后将粉碎后的蒲公英过 80 目筛。
（2） 混合。称取 2 g 蒲公英干粉，加入一定量的纤维素酶和体积分数 60%乙醇混合均匀。
（3） 水浴。用保鲜膜封口，并且恒温水浴一定 时间。
（4） 灭酶。当水浴反应一段时间后，立即将锥形 瓶用沸水浴灭酶 5 min，并且将锥形瓶冷却至室温。
（5） 过滤。用减压过滤装置，过滤样品，并且 用少量的体积分数 60%乙醇润洗抽滤瓶。
（6） 减压浓缩。将过滤好的样品，放进旋转蒸 发仪中。调整旋转蒸发仪转速和温度 （50 ℃），时间 （20 min） 得到浓缩液，记录浓缩液体积。
（7） 定容。用体积分数 60%乙醇，将 0.1 mL 的 浓缩液缓慢定容至 10 mL。
（8） 测定。于波长 327 nm 处测定其吸光度，并 且做 3 次平行，计算绿原酸含量。

1.3.3 蒲公英绿原酸提取工艺研究

以纤维素酶添加量、料液比、酶解温度、酶解 时间为影响因素。以绿原酸提取率为评价指标，研 究 4 个变量对蒲公英绿原酸提取率的影响，确定最 佳提取工艺。

1.3.4 绿原酸对圣女果保鲜作用研究

以圣女果为研究材料，将圣女果分为 9 份，每 份大概 500 g，分别用质量浓度 25，50 mg/L 的绿原 酸溶液喷洒在圣女果上，以蒸馏水处理作为对照， 自然晾干，重复 3 组平行。在第 1，3，5，7，9， 11，13，15 天分别测定圣女果的失质量率、维 C 含 量、可滴定酸含量、可溶性固形物含量、好果率，对 不同质量浓度绿原酸对圣女果的保鲜效果进行研究。

2 结果与分析

蒲公英绿原酸的提取率，随纤维 素酶添加量的增加，绿原酸提取率呈现先上升后下 降的趋势。纤维素酶添加量为 0.8%~1.0%时，绿原 酸的提取率逐渐升高达到最高值。这可能是由于纤 维素酶添加量增高，能够充分分解蒲公英细胞壁中 的纤维素，绿原酸更好地溶出。所以，选取纤维素 酶添加量 1%为提取的最佳添加量。选取纤维素酶添 加量为 0.8%，1.0%，1.6%这 3 个水平进行正交试验 结果分析。蒲公英绿原酸的提取率，随酶解 温度的升高呈现先上升后下降的趋势。当酶解温度 低于 50 ℃时，随着酶解温度的升高，纤维素酶的活性 逐渐变高，其绿原酸的提取率逐渐增加；在 50 ℃的时 候，酶的活性最强，绿原酸的提取率达到了最大值； 当酶解温度超过 50 ℃时，蒲公英绿原酸的提取率， 稳定性下降。可能是因为酶的活性受反应温度的影 响，温度过高使酶失活。同时，酶解温度过高，绿 原酸受热被破坏。因此，选取酶解温度 30，40，50 ℃ 这3 个水平进行正交试验结果分析。在其他条件不变的情况下，当料液 比逐渐增加，绿原酸的提取率先增加后逐渐减少。 低于 1∶16 时，随着料液比的增加，绿原酸的提取 率逐渐增加，这可能是因为乙醇将绿原酸更好地溶 出；当料液比超过 1∶16 时，绿原酸提取率稳定下 降。可能是因为料液比过高，绿原酸质量浓度下降。 因此，选取料液比为 1∶14，1∶16，1∶18 （g∶ mL） 这 3 个水平进行正交试验结果分析。

3 结论

通过原料配比正交试验和稳定剂正交试验得出， 当沙棘浆添加量 25%，枸杞浆添加量 15%，蜂蜜添 加量 2%，白砂糖添加量 6%，黄原胶添加量 0.06%， CMC- Na 添加量 0.04%，果胶添加量 0.07%时，所制 得的产品色泽呈橙黄色；气味清香宜人，具有沙棘 和枸杞独特的香气，无异味；口感细腻、酸甜适口； 组织状态均匀，稳定性较好，无分层、沉淀现象。