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浅谈提取物的抑菌活性

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-10 09:39【

蔓荆子( Vitex trifolia Linn. ) 属马鞭草科( Verbenaceae) 牡荆属( Vitex Linn. ) ,最初收录在《神农本 草经》中,广泛分布于我国的沿海沙滩地,其化学活性组分包括萜类、茨烯、脂肪酸、氨基酸、黄 酮酚类和微量元素等。关于蔓荆子的研究主要集中在医用活性方面,据报道蔓荆子有治疗头痛、 免疫性炎症、降压、防癌和肿瘤、祛痰平喘、抗衰老、抗病毒等功效。



1 材料与方法

1. 1 植物样品与菌种


单叶蔓荆子采自海南省海口市昌江县棋子湾,采回后将叶与种子分开,置于阴凉 处晾干,在干燥箱(上海精宏DHG-9023A鼓风干燥箱)中40 ~ 60 ℃烘干3 d,经粉碎机粉碎后称重并密封,置于0 ~ 4 ℃冰箱中保存备用。主要 供试菌种: 水稻稻瘟病菌( Magnaporthe oryzae) 、橡胶炭疽病菌( Colletotrichum gloeosporioides Penz. Sace) 、黄 瓜枯萎病菌( Fusarium omysporum( Schl) f. sp cucumerinum) 、小麦赤霉病菌( Fusarium graminearum) 、苹果 轮纹病菌( Botryosphaeria dothidea) 和芒果蒂腐病菌( Botryodiplodia theobromae) 、香蕉枯萎病菌( Fusarium oxysporum f. sp. cubense,Foc) 、芒果炭疽病菌( Colletotrichum gloeosporioides Penz) 、火龙果黑斑病菌( Bipolaris cactivora ( Petrak) Alcorn) 、香蕉炭疽病菌( Colletotrichum musae( Berk&Curt) Arx) 、葡萄溃疡病菌( Botryosphaeria dothidea) 和番木瓜炭疽病菌( Colletotrichum gloeosporioides) ,均由海南大学农药实验室提供。试 验对照药剂: 杀菌剂苦参碱( 水剂,有效成分≥0. 3% )



1. 2 单叶蔓荆子粗提物制备

采用冷浸法制备单叶蔓荆子粗提物: 取植物样品种子和叶子,置于烘箱 内烘干 3 d,粉碎后称重。取上述种子和叶子粉末,加入适量丙酮( 以浸过植物材料为宜) 在 25 ℃ 条件下 浸渍提取 72 h,抽滤 3 次,合并滤液减压浓缩,得到单叶蔓荆子种子和叶部的丙酮浸膏。



1. 3 培养平板的制作

分别称取单叶蔓荆子种子和叶部浸提膏 1. 4 g,加入 2 mL 丙酮,用无菌水定容至 7 mL,配制成 200 g·L - 1 母液,备用; 将 19 mL PDA 培养基装于 50 mL 锥形瓶中,121 ℃灭菌 30 min,待培 养基冷却后加入 1 mL 单叶蔓荆子提取物,混匀,分别倒入 3 个 6 cm 培养皿中,制成最终浓度为 10 g·L - 1 的含毒培养平板。以含有相同浓度的丙酮做阳性对照,以含有 0. 01 g·L - 1 的苦参碱为阴性对照。



1. 4 单叶蔓荆子粗提物抑菌活性测定

分别将供试靶标真菌接种于 PDA 培养基上适温培养 3 d,用直径 为 5mm 的打孔器打取菌饼,接种于上述培养平板中央。适温培养 3 d,用十字交叉法测量菌落直径,按照 下列公式计算抑菌率。


病菌生长抑制率 = ( 对照菌落直径 - 处理菌落直径) / 对照菌落直径 × 100%



1. 5 单叶蔓荆子种子粗提物毒力方程建立

按照 1. 3 中方法将单叶蔓荆子种子粗提物配制成质量浓度 为 400,200,100,50,25 g·L - 1 ,分别移取 1 mL 加入至 19 mL 灭菌的 PDA 中,摇匀后迅速分装于 3 个 6 cm 的培养皿中,待培养基凝固后分别接入直径为 5 cm 的小麦赤霉病菌、苹果轮纹病菌菌种。25 ℃ 培养 72 h,十字交叉法测量菌落直径,按照 1. 4 中公式计算抑菌率,建立毒力回归方程,求 EC50。



2 结果与分析

采用生长速率法测定单叶蔓荆子叶部粗提物对水稻稻瘟病 菌等 6 种植物病原真菌的抑菌活性,结果( 表 1) 发现: 该粗提物对不同靶标菌抑菌活性不同,其中对小麦 赤霉病菌抑菌效果最好,培养后期抑菌率可达 50% ; 对橡胶炭疽病菌活性最差,培养后期对该靶标菌起到 促进生长作用。总体来看,单叶蔓荆子叶部粗提物对供试靶标菌抑菌活性均低于阳性对照( 苦参碱) 。



结果发现: 该粗提物对供试的 8 种靶标菌均有不同程度的抑 菌活性,尤其对小麦赤霉病菌和苹果轮纹病菌持效性好,测试时间内对小麦赤霉病菌抑菌率可达 70% ,对 苹果轮纹病菌抑菌率达 60% 以上; 此外,该粗提物对水稻稻瘟病菌培养 24 h 抑菌率可达 83. 56% ,后期虽 然抑菌效果有所下降,但抑菌率仍在 60% 左右; 该粗提物对橡胶炭疽病菌、芒果炭疽病菌、火龙果黑斑病 菌及番木瓜炭疽病菌均表现出促进菌丝生长的作用。所获得的数据整体来看,单叶蔓荆子种子粗提物普 遍低于阳性对照( 苦参碱) 。



3 讨 论

小麦赤霉病是小麦在全世界普遍发生的主要病害之一,已成为影响小麦高质量、高产量的重大隐患, 若防治不当会造成小麦减产乃至绝收等情况; 苹果轮纹病又称粗皮病、轮纹烂果病,是苹果主要病害之 一,主要危害部位在树干和果实,植株得病后,其树势、果实会严重的削弱和腐烂,后果不容忽视。生物 防治植物病害因具备对生态环境影响小,低残留、无污染的等优点越来越受到人们重视。本研究发现单 叶蔓荆子叶子粗提物对供试靶标菌影响力不同,尤其对小麦赤霉病菌和苹果轮纹病菌抑菌活性高、持效 性长,具有进一步开发应用的潜在价值。



 


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