牙龈卟啉单胞菌活性的影响

牙科种植修复已经成为牙列缺损或牙列缺失的一种 常规治疗手段，纯钛及其合金作为种植体材料具有良好的 生物相容性。随着口腔种植研究的不断发展，简化治疗流程，缩短治疗时间，提高种植手术的远期成功率是目前最 为关注的问题。其根本解决办法是对种植体表面进行生化 改性，以期加快形成种植体骨结合，早期功能负载，有效降低术后种植体周围炎的发生率。

纯钛片（99.99%，陕西宝鸡鹏 润新金属材料有限公司）、蒲公英多糖（95%，陕西慈缘生物技术有限公司）、牙龈卟啉单胞菌（广东省微生物研究所）、台盼蓝（北京雷根生物技术有限公司）、BHI血 琼脂平板（广东环凯微生物科技有限公司）、直流恒压 电源（DPM8600，杭州钧策器械股份有限公司）、厌氧工 作站（上海万锐实验室设备有限公司）、场发射扫描电镜 （Merlin，德国）、X射线光电子能谱仪（THERMO FISHER SCIENTIFIC，美国）、倒置荧光显微镜（OLYMPUS，日本）

商业圆形纯钛片（10mm× 10mm×1mm）依次经800# 、1000# 、1200# 鹰派砂纸打磨，丙 酮、乙醇、去离子水超声清洗，每次15min，空气中干燥备 用。在玻璃烧杯中配制300ml电解液（乙二醇97vol%、氟化 铵0.5wt%、水3vol%）。连接直流恒压电源，将钛片置于阳 极，铂片置于阴极，设置氧化电压20V，氧化时间2h。氧化 完成后钛片置于450℃高温马弗炉中烧结3h，乙醇、去离子 水超声清洗，每次5min，钛片清洗完成后置于烘烤箱中干 燥备用。

称取一定量的蒲公英多糖粉末溶于无水乙醇/DMSO (DMSO＜1vol%)，分别配 制浓度为50mg/ml、100mg/ml、200mg/ml的蒲公英多糖溶 液。将阳极氧化处理的钛片分别置于三种不同浓度的多糖 溶液，超声振荡处理30min。去离子水漂洗钛片，去除表面 未负载的多糖，空气中干燥备用。设置阳极氧化钛片为对 照组（A组），阳极氧化钛片负载不同浓度的蒲公英多糖为 实验组：多糖浓度50mg/ml（B组），100mg/ml（C组）， 200mg/ml（D组）。

FESEM结果：对照A组钛片表面可见管 径均匀的纳米管阵列，纳米管管壁光滑，直径约80～100nm （图1a）。实验组（B、C、D组）钛片表面可见纳米管表面 及管内有白色粟粒状颗粒物沉积（图1b、图1c、图1d）。 图中可以看出颗粒物的量与负载蒲公英多糖的浓度呈正相 关，D组＞C组＞B组。

XPS检测结果：实验组（B、C、D 组）和对照组（A组）钛片表面均含有C、N、O元素，实验 组特征性C元素峰值显著增高，且与负载蒲公英多糖的浓度 呈正相关，D组＞C组＞B组。 2.3 牙龈卟啉单胞菌(Pg)台盼蓝染色：台盼蓝染色结果： 荧光显微镜下观察活菌呈现透明，死菌被染成蓝色。实验 组（B、C、D组）钛片表面死菌数量显著高于对照组（A 组），各实验组间钛片表面死菌数量与负载蒲公英多糖的 浓度呈正相关，D组＞C组＞B组。

随着现代纳米技术的发展，材料表面纳米化改性已成为增加钛 种植体表面粗糙度的一种优良方法。有学阵列者研究表明， 采用乙二醇-氟化铵水溶液为电解液，阳极氧化电压为20V， 氧化时间为2h的条件下，可制备出高度有序的TNTs。本 实验采用相同的氧化参数成功在钛片表面制备出二氧化钛 纳米管，场发射扫描电镜下观察纳米管结构规整，直径约 80～100nm，管壁光滑，实验结果与以往研究相一致。二氧化钛纳米管负载蒲公英多糖复合涂层的抗菌性： 上海精宏认为目前公认菌斑聚集是导致种植体周围炎的始动因子，聚集 在种植体周围的菌斑主要为革兰氏阴性厌氧菌，尤其是牙 龈卟啉单胞菌。为了研究蒲公英多糖改性的纳米管的抗 菌性，本研究选定了牙龈卟啉单胞菌为研究对象。实验采 用台盼蓝染色法检测牙龈卟啉单胞菌活性，正常活菌胞膜 结构完整，排斥台盼蓝染液进入菌体，当细菌活性丧失， 胞膜通透性增加，因而被染成蓝色。本实验结果显示，染 色后显微镜下观察到实验组钛片表面死菌数量显著高于对 照组（P＜0.05），实验组中负载高浓度多糖的纳米管表面 死菌数量高于负载中浓度多糖的纳米管（P＞0.05）和负载 低浓度多糖的纳米管（P＜0.05），可以得出二氧化钛纳米管负载蒲公英多糖复合涂层对牙龈卟啉单胞菌具有较强的 抗菌性，在一定范围内，抗菌活性与蒲公英多糖浓度成正 相关关系。关于蒲公英多糖的抗菌机制，有研究表明，蒲 公英多糖可抑制细菌细胞壁的合成，促使细胞壁破裂，还 能抑制DNA和蛋白质的合成。有关蒲公英多糖抑制牙龈 卟啉单胞菌活性的具体作用机制尚不清楚，有待后续实验 进一步研究。