精宏设备对于野生桑黄菌分离鉴定

实 验

液体发酵培养基Ⅲ: 马铃薯葡萄糖液体 培养基( PD) 。 H1650Ｒ 型湘仪离心机，湖南湘仪公司。 JY－SPCT 型电泳槽，北京君意公司。 Y04S－ 3C 型凝胶成像系统，北京君意 公司。 YP* N 型电子天平，上海精密科学仪器 公司。 OSE－DB－ 02 型金属浴，北京天根生化 公司。 VX100 型涡旋振荡器，Labnet 公司。 小型离心机，BioExpress 公司。 OSE－GP－02 型 TGreat 梯度 PCＲ 仪( 96 模块) ，北京天根生化公司。 HZQ－F160 型全温振荡培养箱，苏州培 英公司。 DNP 电热恒温培养箱，上海精宏公司。 LDZX－75XBS 型立式压力蒸汽灭菌器， 上海申安器械厂。 SW－CJ 型洁净工作台，苏州安太空气技 术公司。。待平板上的桑黄组织萌发， 之后从菌落边缘用接种针挑取新鲜菌丝进一 步纯化培养，直至单一菌落长出，即为纯菌。 将纯菌接种 PDA 斜面培养基，28 ℃ 恒温条 件下避光培养，待长满斜面后，将试管斜面转 移到冰箱( 4 ℃ ) 中避光保存备用。

结果与分析

基于分子生物学的菌种鉴定技术近年来 发展 迅 速，18 s rDNA 及 28 s rDNA 间 的 rDNA 内 转 录 间 隔 区 ( internal transcribed spacer，ITS) 序列分析技术被广泛应用于多种 真菌种属水平的分类鉴定研究中。ITS 测 序分析具有测序方便、稳定性好、进化速率快 等优点。研究首先对 9 株分离菌提取基因 组，以 此 DNA 为 模 板、ITS1 /ITS4 为 引 物， PCＲ 扩增获得 800 bp 左右的特异性扩增片 段，送样测序获得 ITS 序列信息。利用 NCBI 数据库对 9 株菌 ITS 序列在线 BLAST，利用 MEGAX 软件，基于 Neighbor－joining 法构建 系统发育树并比较菌株之间的同源关系。结果表明，9 株菌均属于纤孔菌 属 ( lnonotus) 。SH－8 和 SH－ 9 与粗毛纤孔 菌 ( Inonotus hispidus KAＲ 1mLP1) 相似性最 高，序列相似性均在 99%以上，遗传距离在 0． 01 以 内。 其它菌株与粗毛纤 孔 菌 ( Inonotus hispidus BWB01) 相似性最高，序列 相似性均在 99%以上，遗传距离在 0． 01 以 内。综上可知，从三份桑黄样本中分离到的 菌株可归为粗毛纤孔菌。包海鹰等系统 分析了古书中关于桑黄生境、子实体特征、药 用功效，认为粗毛纤孔菌最符合“桑黄”的特 点。这与研究结果相符合。

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