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大鼠神经生长因子及其受体表达的影响分析(D

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-12-11 09:10【

子宫内膜异位症( endometriosis,EMs) 是妇科常 见疾病,而疼痛是 EMs 突出的临床症状之一,主要 表现为痛经、性交痛和慢性盆腔痛等。据报道,15 ~ 49 岁女性 EMs 的患病率为 0.1%。我们根据多年 临床经验,认为“湿”“热”“瘀”并存且互为因果是 导致 EMs 反复疼痛、缠绵难愈的主要病理机制,故 采用活血化瘀、清热利湿法,并拟定盆痛灵方治疗 EMs,临床疗效显著。前期研究证实,盆痛灵方能 提高小鼠痛阈,且对 EMs 模型大鼠的治疗作用可 能与降低腹腔液神经生长因子( nerve growth factor, NGF) 水平有关。


1 材料与方法


 1.1 实验材料


 1.1.1 动物 


SD 大鼠,雌性,SPF 级,体质量( 180± 20) g,购自北京维通利华实验动物有限公司,合格 证号: SCXK( 沪) 2014-0016。所有动物均饲养于上 海中医 药 大 学 实 验 动 物 中 心,饲 养 室 温 度 20 ~ 26 ℃,相对湿度 40% ~ 70%,光照时间 12 h,可自由 饮食。动物实验严格遵守上海中医药大学实验动 物伦理委员会的要求。 


1.1.2 药物与试剂 


盆痛灵方由三棱、莪术、延胡索、川楝子和虎杖组成,水煎剂由上海中医药大学附属龙华医院提供,临用前稀释至所需浓度。消炎痛片,湖北东信药业有限公司产品( 规格: 25 mg / 片,批准文号: 国药准字 H42021462) ,临用前配制成 0.3 mg /ml 混悬液。


1.1.3 主要仪器


DHG-9053A 电热鼓风干燥箱,嘉兴市中新医疗仪器有限公司; 精宏DNP9082 恒温孵育箱,上海精宏实验设备有限公司; BX53 显微镜,日 本 Olympus 公 司; Light Cycler  96 实 时 荧 光 定 量 PCR 仪,瑞士 Roche 公司; Tissuelyser-24 多样品组 织碾 磨 器,上海净信实业发展有限公司; MIKRO220R 低温高速离心机,德国 Hettich 公司; MK3 酶标仪,美国 Thermo 公司; EPS 300 电泳仪、 VE 186 转 移 电 泳 槽,上海天能科技有限公司; ChemiQ 4600 化学发光成像系统,上海勤翔科学仪 器有限公司。


1.2 造模方法 


参照报道,采用大鼠自体内 膜种植的方法建立 EMs 模型。假手术组大鼠开腹 后结扎一侧子宫,将结扎段子宫剪除后关腹。造模 2 周后开腹检查,移植处形成突起且内含积液,视为 造模成功。


 1.3 分组与干预 


取造模成功的大鼠 50 只,随机 分为模型组、消炎痛组及盆痛灵低、中、高剂量组, 每组 10 只; 另设假手术组 10 只。消炎痛组大鼠给 予 3 mg·kg-1 ·d-1 消炎痛混悬液,盆痛灵低、中、高 剂量组大鼠分别给予 10. 2、20. 4 ( 临 床 等 效 量) 、 40.8 g·kg-1 ·d-1 盆痛灵方水煎液,各组均采用直肠 给药方式,每日 1 次,连续 4 周; 模型组和假手术组 给予等体积 0.9%NaCl 溶液。末次给药后,采集各组大鼠的子宫内膜组织。


2 结果 


NGF 及其受体 mRNA 表达的 影响 与假手术组相比,模型组大鼠子宫内膜组织 NGF、TrkA、p75NTR 的 mRNA 表 达 显 著 升 高 ( P<0.01) 。与模型组相比,消炎痛组和盆痛灵中、 高剂量 组 NGF 和 TrkA 的 mRNA 表 达 明 显 降 低 ( P<0.05,P<0.01) ,消炎痛组和盆痛灵高剂量组 p75NTR 的 mRNA 表达亦明显下调( P<0.01) 。盆痛 灵低剂量组与模型组的各项 mRNA 表达比较,差异 均无统计学意义( P>0.05) ; 消炎痛组与盆痛灵高剂 量组的各项 mRNA 表达比较,差异亦均无统计学意 义( P>0.05) 。 与盆痛灵低剂量组相比,高剂量组大鼠子宫内 膜组织 NGF、TrkA、p75NTR 的 mRNA 表达均显著降 低( P<0.01) ,中剂量组 TrkA mRNA 表达亦明显降 低( P<0.05) ; 与盆痛灵中剂量组相比,高 剂 量 组 p75NTR mRNA 表达明显下调( P<0.01) 。与假手术组相比,模型组与 盆痛灵低剂量组 NGF 及其受体 p75NTR、TrkA 高表 达于异位内膜组织的腺上皮细胞与间质细胞胞浆, 少量表达于胞核。与模型组相比,消炎痛组及盆痛 灵中、高剂量组 NGF 及其受体 p75NTR、TrkA 的阳 性表达明显减弱。与盆痛灵低剂量组相比,中、高 剂量组 NGF 及其受体 p75NTR、TrkA 的阳性表达明 显减弱。


3 讨论 


EMs 病因尚不明确,且缺少能完全治愈的药 物,而停药后又易于复发、疼痛难愈,严重影响患者 的生活质量。NGF 是一种能够刺激神经元生长的 活性多肽,在伤害性感受器的功能调节中起关键性 作用。本研究表明,异位内膜种植后,内异灶 NGF 的 mRNA 和蛋白表达水平显著升高; 前期研究发现 内异灶周围的腹腔液中 NGF 和炎症因子 IL-1β、 TNF-α 含量增多,推测异位内膜组织的形成促使病 灶局部及周围细胞释放 NGF 及炎症因子。内异 灶中的 NGF 可激活肥大细胞,使其在内异灶中脱颗 粒释放 IL-1β、TNF-α 等炎症因子。当表达 IL-1β 的 内膜随经血逆流至腹腔后,腹腔内会产生高浓度 IL-1β并激活巨噬细胞分泌 TNF-α,共同诱导病灶周 围形成炎症状态。这说明病灶周围多种炎症介 质过度表达导致的免疫炎症环境与病灶中 NGF 异 常表达高度相关。





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