泽兰多糖超声提取工艺的优化

泽兰源于唇形科地笋属植物毛叶地瓜儿苗 Lycopus lucidus Turcz. var. hirtus Ｒegel 的干燥地上部分，夏 秋二季茎叶茂盛时采割，除去杂质，晒干。具有活血调 经，袪瘀消痈，利水消肿之功。用于月经不调，经闭，痛 经，产后瘀血腹痛，疮痈肿痛，水肿腹水，泽兰资源丰 富，价格便宜，分布于全国大部地区。对于泽兰多糖 的超声提取工艺在国内外尚未见公开报道，故本研究 以泽兰多糖的超声提取工艺作为研究对象。

1 实验材料

1. 1 仪器

MAPADA UV － 1800 紫 外 － 可 见 分 光 光 度 计; METTLEＲ AE240 十万分之一精密天平( 瑞士) ; Sartorious BS224S 万分之一精密天平 ( 北京赛多利斯公 司) ; KQ － 700DB 型数控超声波清洗器( 昆山市超声仪 器有限公司) ; EYELA N － 100 旋转蒸发仪( 上海爱朗 仪器有限公司) ; SHZ － D( Ⅲ) 型循环水式多用真空泵 ( 巩义市予华仪器有限责任公司) ; 精宏DHG-9146A 型电 热恒温鼓风干燥箱( 上海精宏实验设备有限公司) ; XJA 100A 型高速粉碎机( 姜堰市银河仪器厂) ; 京立LD25 － 2 离心机( 北京京立离心机有限公司) 。

1. 2 材料

泽兰药材购自郑州市东升大药房，经河南中医药 大学药学院生药学科董成明教授鉴定为唇形科地笋属 植物毛叶地瓜儿苗 Lycopus lucidus Turcz var. hirtus Ｒegel 的干燥地上部分。 无水乙醇( 天津市福晨化学试剂厂) 、苯酚( 天津 市恒星化学试剂有限公司) 、硫酸( 开封市药品化学试 剂厂) ，均为分析纯。

2 实验方法与结果

2. 1 计算方法

药材中以葡萄糖计多糖的提取率 W = m /M × 100% ( m 为以葡萄糖计药材中多糖的质量，M 为药材 质量) 。

2. 2 泽兰多糖含量测定的方法

2. 2. 1 葡萄糖标准品溶液的配制

精密称取 105 ℃ 干燥至恒重的无水葡萄糖标准品 111. 16 mg，置 100 mL 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度 为 1111. 6 μg /mL 的葡萄糖贮备液，备用。

2. 2. 2 标准曲线的建立

精密吸取葡萄糖贮备液 0. 5，1. 0，2. 0，4. 0，6. 0，8. 0 mL 于 100mL 容量瓶中，蒸 馏水定容，摇匀，得葡萄糖浓度分别为 5. 558、11. 116、 22. 232、44. 464、66. 969、88. 928 μg /mL 的标准溶液。 分别量取上述葡萄糖标准液与蒸馏水空白溶液 2. 0 mL 于 15 mL 试管中，分别加 1 mL 苯酚溶液、5 mL 浓 硫酸溶液振荡摇匀，室温反应 30 min ，蒸馏水作为空 白，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线， 得标准曲线方程为: Y = 76. 591X － 0. 0846，r = 0. 9997， 结果表明，葡萄糖浓度在 5. 558 ～ 88. 928 μg /mL 范围 内，与吸光度线性关系良好。

2. 3 药材粉碎的必要性考察

精密称定未粉碎的药材 5 份，每份 2 g。料液比 1: 30( g: mL) ，置具塞的 150 mL 的锥形瓶中，在超声清 洗器中 25 ℃、700 W 超声 15 min，2 次，提取液用 200 目滤网滤过合并两次滤液。离心( 3000 r/min) 5 min， 弃去沉淀，上清液用旋转蒸发仪浓缩至 20 mL。浓缩 液置烧杯中，把烧杯放在磁力搅拌器上，匀速快速搅 拌，缓慢加入 80 mL 无水乙醇，使溶液成 80% 的乙醇， 然后放在 4 ℃的冰箱里，静置 1 h。离心( 3000 r/min) 5 min，用无水乙醇洗涤沉淀离心至上清液无色，沉淀 放在真空干燥箱 40 ℃，干燥至干，即得泽兰粗多糖，称 取泽兰粗多糖 3 mg 左右，用蒸馏水定容在 25 mL 量瓶中，按“2. 2. 2”项下方法测其粗多糖中以葡萄糖计多 糖的含量，计算出药材中以葡萄糖计多糖的质量。

3 讨论

本实验在优选超声提取泽兰多糖工艺参数时，首 先采用的响应面的 Box － Behnken 法设计，用软件 Design － Expert. 8. 05 进行二次多项式拟合。结果显示， 软件自动拟合的二次多项式方程，有多项因子对模型 的影响 P 值大于 0. 05，且失拟项的 P 值小于 0. 05，故 需要人工去因子重新拟合。可结果，进行了多个 人工拟合方案都不能达到所有因子达到对模型显著影 响，且失拟项的 P 值一直处在小于 0. 05 的水平上，这 说明本实验超声提取泽兰多糖的工艺选择的参数值及 多糖提取率，不适合响应面法分析，对二次多项式所建 立的模型的契合度不够。因此，本实验采用了适应性 较强的正交实验设计来优化超声提取泽兰多糖的工 艺。



 

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