生化培养箱对于枯萎病病原菌室内毒力测定

橡胶树( Hevea brasiliensis) 生产的乳胶是我国重要的战略资源，随着橡胶树种植年代增加及周边生态 环境变化，一些新的病虫害逐渐显现出来。2017 年在对海南省琼中加钗农场橡胶树的病情调查中发现 尖孢镰刀菌( Fusarium oxysporum) 引起了橡胶树枯萎病。该病导致橡胶幼树顶梢自上而下回枯变褐，呈现 “半边死”症状。枯死枝条茎干木质部髓心变褐，木质部横切面有零散分布的蓝变症状。

1 材料与方法

1． 1 材料

供试菌种: 供试尖孢镰刀菌( Fusarium oxysporum) 分离于海南省琼中加钗农场热研 7 － 33 － 97 橡胶树幼树枝条。供试药剂: 97． 3 % 咪鲜胺( prochloraz) 原药购自江苏辉丰农化股份有限公司; 97 % 异菌脲( iprodione) 原药购自江苏快达农化股份有限公司; 96 % 百菌清( chlorothalonil) 原药购自山东青岛 奥迪斯生物科技有限公司; 96% 吡唑醚菌酯( pyraclostrobin) 购自海南正业中农高科股份有限公司; 97． 2 % 多菌灵( carbendazim) 原药购自江苏省太仓市农药厂; 99 % 水杨羟肟酸( SHAM) 购自上海麦克林 生化科技有限公司。将各原药配成10 000 mg·L － 1 的母液，4 ℃保存。供试培养基: PDA( 马铃薯葡萄糖琼 脂) 培养基: 马铃薯 200 g，葡萄糖 15 g，琼脂粉 15 g，蒸馏水 1 000 mL，灭菌备用。

1． 2 方法

1． 2． 1 含药平板的制备

分别取各药剂母液加入到定量的 PDA 培养基中摇晃混匀，使培养基含咪鲜胺的浓度为 0，0． 1，0． 5，1，5，10 mg·L － 1 ，含百菌清的浓度为 0，1，2，4，8，16 mg·L － 1 ，含吡唑嘧菌酯的浓度 为 0，0． 1，0． 5，1，5，10 mg·L － 1 ( 为降低旁路呼吸途径对药剂的影响，供试培养基中加入终浓度为 100 mg·L － 1 的水杨羟肟酸) ，含多菌灵的浓度为 0，0． 1，0． 5，1，5，10 mg·L － 1 。将含药培养基倒入灭菌的 培养皿中，每皿 20 mL，每个处理设置 3 个重复。

1． 2． 2 处理方式

取制作好的含药平板，空白对照为不加药剂的 PDA 平板。使用 5 mm 打孔器在 PDA 培养基上 28 ℃培养 2 d 的病原菌菌落边缘取菌碟，分别接于处理培养基平板的中心位置上，每个处理 做 3 个重复，放置于 28 ℃生化培养箱（上海精宏SHP-080生化培养箱）内培养，于对照组菌落生长 6 ～ 7 cm 时，用十字交叉法测量菌落直径 并记录。

1． 2． 3 药剂复配

选取 2 种药效作用较好的药剂进行复配，以 EC50浓度按照不同比例配比，配比为 1∶ 1， 1∶ 3，1∶ 5，3∶ 1，5∶ 1。再在不同比例配比下设置 5 个浓度梯度，浓度稀释按照逐级稀释法稀释浓度，实验按 照 1． 2． 2 和 1． 2． 3 中所述方法进行。

1． 2． 4 数据处理

使用 EXCEL2016，DPS7． 05 数据处理软件对所得的数据进行统计分析，得出各药剂的 毒力回归方程、EC50和相关系数。

2 结果与分析

2． 1 4 种杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果

4 种杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果见 表 1。由表 1 可见，4 种常见杀菌剂对尖孢镰刀菌丝的生长抑制效果为: 咪鲜胺 ＞ 多菌灵 ＞ 吡唑醚菌酯 ＞ 百菌清。结果表明，麦角甾醇合成抑制剂类杀菌剂的咪鲜胺和有机杂环类( 苯并咪唑类) 杀菌剂的多菌灵 对尖孢镰刀菌具有较高的抑制活性，故选择咪鲜胺和多菌灵作为单剂进行下一阶段的复配实验。

2． 2 复配杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果

复配杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果见 表 2，由表 2 可见，咪鲜胺和多菌灵 1∶ 1，1∶ 3，1∶ 5，3∶ 1 及 5∶ 1 复配条件下 EC50值分别为 0． 96，0． 71，0． 17， 0． 87，1． 01 mg·L － 1 ，1∶ 5 的复配效果最佳，5∶ 1 的复配效果最差。咪鲜胺和多菌灵的复配增效系数见表 3，由表 3 可见，咪鲜胺和多菌灵 1∶ 1，1∶ 3，3∶ 1 及 5: 1 复配条件 下增效系数分别为 0． 92，1． 37，0． 92，0． 77，均在 0． 5 ～ 1． 5 之间，2 者药效作用为相加作用，无拮抗作用。 咪鲜胺和多菌灵配比在 1∶ 5 时，SＲ 值为 6． 01，表现为增效作用。

3 讨 论

对 4 种常见杀菌剂对橡胶树尖孢镰刀菌丝的生长抑制进行了测定，除百菌清外，咪鲜胺、多菌 灵、吡唑醚菌酯抑制菌丝效果显著。其中麦角甾醇合成抑制剂类杀菌剂的咪鲜胺和有机杂环类( 苯并咪 唑) 杀菌剂的多菌灵对橡胶树尖孢镰刀菌的抑菌效果尤为突出，故选择咪鲜胺和多菌灵进行复配实验，通 过 5 种不同比例复配得出的抑菌效果来看，其中咪鲜胺: 多菌灵为 1∶ 5 的复配效果最佳，表现为增效作用， 并且 EC50达到了 0． 17 mg·L － 1 ，效果优于任何一种单剂。 综上所述，橡胶树枯萎病可由常用药剂进行防治，鉴于咪鲜胺与多菌灵的复配效果尤为突出，推荐在 病害发生时采用，避免单一药剂的过度使用所导致病菌抗药性的增强。



 

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