精宏鼓风干燥箱在糖尿病大鼠胰腺的保护作用的

他克莫司是从链霉菌属中分离出的一种高效 免疫抑制剂，广泛应用于临床器官移植术后的抗 免疫排斥反应中。但他克莫司应用存在多种不良反应，其中最主要的是移植后新发糖尿病(new onset diabetes after transplantation，NODAT)，导致 移植相关并发症的风险增加，如排斥反应、移植物功能减退或丧失以及感染，影响受者长期存活率。

健康 SD 大鼠，SPF 级，40 只，体质量 180~220 g，♀♂各半，由温州医科大学动物实验中 心提供，动物许可证号：SYXK(浙)2005-0061。

滇结香花(西藏月王生物科技有限公司)由温 州医科大学附属第一医院林崇良副主任药师鉴定 为瑞香科植物结香 Edgeworthia gardneri (wall.) Meisn.的花蕾。取滇结香花 4.5 kg，粉碎，95%乙 醇常温浸提 3 次，过滤，合并滤液，乙酸乙酯萃 取，减压浓缩并真空干燥得到 EG 13.5 g。将提取 物换算成生药并配成相当于生药含量 15 mg·mL1 浓度的溶液，4 ℃冰箱保存备用。罗格列酮(国药 准字 H20030569，成都恒瑞制药有限公司，批号： 150607；规格：每片 4 mg)；他克莫司注射液(国 药准字 J20090136，安斯泰来制药有限公司，批号： 5A3290A；规格：每支 1 mL)。

大鼠胰岛素ELISA试剂盒(批号：R20160122)、糖化血红蛋白试剂盒(批号：20160120)、苏木素(批 号：20150225)、伊红(批号：20150225)均购自南 京建成生物工程研究所；无水乙醇(杭州龙山精细 化工有限公司，批号：20150912)；中性树胶(中国 上海标本模型厂，批号：20150901)；Trizol(碧云 天公司，批号：061716161009)；cDNA 逆转录试 剂盒(美国 Thermo 公司，批号：00424956)； SYBRGreen(Roche 公司，批号：18570700)；GAPDH 抗体(美国 Bioworld 公司，批号：AA55151)；胰岛 素受体底物蛋白 2(insulin receptor substrate 2， IRS-2)抗体(美国 Santa cruz biotechnology 公司，批 号 ： E2716)；辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IgG(biosharp 公司，批号：1266710212)；PCR 引 物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。实验所用 其他化学试剂均为分析纯。

便携式血糖仪、血糖试纸(长沙三诺生物传感 股份有限公司，批号：3703NC)；FA1204C 型电子 天平(上海精密科学仪器有限公司)；DHG-9203A 型 电热恒温干燥鼓风干燥箱(上海精宏)； Olympus 光学显微镜、日立 7180 型全自动生化仪 均来自日本日立公司； 7500 荧光定量 PCR 仪(美 国 Applied Biosystems 公司)；ThermoLegend Micro 17R 微量离心机(美国 Thermo 公司)；Mycycler 梯 度 PCR 扩增仪、电泳系统、垂直电泳槽、Molecular Imager 均来自美国 Bio-Rad 公司。

SD 大鼠 40 只随机分为正常组、模型组、滇 结香花组和罗格列酮组，每组 10 只。参照文献采 用单因素腹腔注射他克莫司的方法建立糖尿病大 鼠模型，除正常组外其余各组大鼠给予腹腔 注射 1 mg·kg1 ·d1 他克莫司，正常组腹腔注射等体 积生理盐水。以 2018 年 ADA 糖尿病医学诊疗标 准，空腹血糖≥7.0 mmol·L1 (空腹 8 h 以上)作为糖 尿病诱导成功；造模的同时进行药物干预，正 常组与模型组大鼠灌胃等体积纯水，滇结香花组 (150 mg·kg1 ·d1 )灌胃 EG 溶液，罗格列酮组 (0.4 mg·kg1 ·d1 ) 灌胃罗格列酮，灌胃容积 10 mL·kg1 ，连续 15 d。

给药第 15 天，禁食 8 h 后，给予 10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.3 mL·kg1 )，固定，消毒。下腔 静脉取血，分离血清；取大鼠胰腺，生理盐水清 洗，滤纸吸去多余水分，4%多聚甲醛固定；另取 同部位组织，迅速冷冻于80 ℃冰箱，用于 RT-PCR 及 Western blot 试验。

动物一般情况观察：每天观察大鼠饮食饮水、 精神状态、活动情况、大便性状及尿量，隔日测体质量并记录；全自动生化仪测血糖；ELISA 法 测定胰岛素含量；比色法测定糖化血红蛋白含量； 胰腺作石蜡切片，HE 染色，并用光学显微镜观察 胰腺胰岛细胞受损情况。

胰岛素分泌指数(HOMA-β)、胰岛素抵抗 指数(HOMA-IR) 根据所测空腹血糖水平(FPG)、空腹胰岛素水 平 (FINS) 计 算 HOMA-β=20×FINS/(FBG3.5) ， HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。

正常组大鼠体质量增加明显，精神状况良好， 皮毛有光泽，动作自如，反应灵敏。模型组大鼠 较暴躁，尿量无明显变化。与正常组比，罗格列 酮组大鼠后期体重均值略升高；滇结香花组大鼠 体重略降低，并出现不同程度反复腹泻，3 只出现 消瘦，无白内障及尾、足坏死，动作自如，反应 灵敏度降低。各组每日进食量和饮水量保持稳定， 组间比较无显著性差异。与正常组比，模型组大鼠血糖、胰岛素抵抗 指数、糖化血红蛋白升高(P<0.01)，胰岛素、胰岛 素分泌指数降低(P<0.05，P<0.01)。与模型组比， 滇结香花组血糖、糖化血红蛋白降低(P<0.05， P<0.01)，胰岛素、胰岛素分泌指数升高(P<0.05， P<0.01)；罗格列酮组大鼠血糖、糖化血红蛋白降 低(P<0.01)，胰岛素、胰岛素分泌指数升高(P<0.01)。病理检查表明正常组大鼠胰腺组织切片中胰 岛多为圆形或椭圆形细胞团，分散于胰腺腺泡之 间，细胞团大小不一，胰岛细胞为多边形，排列 整齐，分布均匀，胞浆淡染呈浅粉红色，核多为 圆形深染。模型对照组大鼠胰腺组织切片中胰岛 细胞可见脂质空泡，细胞核大小不等，细胞排列 紊乱。滇结香花组大鼠胰腺组织切片中胰岛细胞 形态结构改善，部分细胞发生空泡变性。

目前据国内外文献报道，已从滇结香花中分 离出的化合物主要有香豆素类、黄酮类、挥发油 类、甾类、有机酸及含氮化合物等。其中滇结 香花甲醇提取物的各萃取相具有抗氧化能力； 滇结香花粗提物能促进胰岛素的分泌，显著降低 小鼠餐后血糖浓度；滇结香花乙酸乙酯部位和 正丁醇部位均能显著抑制高浓度葡萄糖致糖尿病小鼠、盐酸肾上腺素致糖尿病小鼠、四氧嘧啶致 糖尿病小鼠血糖的升高；滇结香花提取物能激 活 PPARβ 和 PPARγ，用于治疗糖尿病肾病。综上所述，EG 具有明显的降低糖尿病模型大 鼠空腹血糖、血浆糖化血红蛋白含量的作用。其 作用机理可能为通过胰腺胰岛素信号转导通路中 胰岛素受体底物，修复胰岛 β 细胞，保护胰腺，促 进胰岛素分泌，从而降低血糖。

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