巴戟天配方颗粒的标准汤剂分析-DHG-9140A使用

巴 戟 天 为 茜 草 科 植 物 巴 戟 天 Ｍｏｒｉｎｄａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓＨｏｗ 的干燥根，是中国著名的“四大南 药”之 一，始 载 于《神 农 本 草 经》，味 甘 辛，性 微 温，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效，用于治疗阳 痿遗精、宫 冷 不 孕、月 经 不 调、风 湿 痹 痛、筋 骨 痿 软 等。巴戟天药材中主要含有蒽醌类、环烯醚 萜 苷 类、多糖类等成分。其中，蒽 醌 类 化 合 物 主 要 有 ２－羟基－１－甲氧基蒽醌、ｒｕｂｉａｓｉｎＡ 和ｒｕｂｉａｓｉｎＢ 等， 均具有 抗 菌、降 压、降 脂、抗 癌、抗 病 毒、凝 血 等 活 性。环烯醚萜苷类化合物主要包括水晶兰 苷、 四乙酰车叶 草 苷等，具有较强的抗炎镇痛作用。 目前，从巴戟天中分离得到的糖类主要有水溶性多 糖（ＭＯＨＰ－１）、甘露糖、巴戟甲素（原称巴戟素）、耐 斯糖等多种低聚糖，研究表明其具有显著的抗抑郁 作用。

１ 主要仪器与试药

ＳｈｉｍａｄｚｕＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎＬＣ－２０ＡＴ 高 效 液 相 色 谱仪，ＳａｒｔｏｕｉｕｓＣＰＡ２２５Ｄ 分 析 天 平，水 循 环 真 空 泵，ＳＥＮＣＯＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．Ｌｔｄ．提供；ＪＭ－Ａ５００２电 子天平，浙江余姚市纪铭称重校验设备有限公司提 供；DHG-9140A 干燥箱，上海精宏仪器设备有限公司提供；KQ-500DE超声波清洗器，江苏昆山舒美超声仪器有限公司提供。 耐斯糖对照 品，批 号 为１１１８９１－２０１４０３；水 晶 兰 苷 对 照 品，批 号 为 １１１８７０－２０１３０３；乙 腈，批 号 为 ２０１６１０１４；甲醇，色谱纯，批号为２０１６１０２０；水，纯化 水；磷酸，分析纯。 巴戟天药材共计１５批，经河北省药品检验研究院孙宝惠老师鉴定为正品，样品来源信息见表１。

２ 方法与结果

２．１ 标准汤剂样品制备

取巴戟天饮片１００ｇ，放入２Ｌ圆底烧瓶中，加水 提取２次。第一煎加水９００ｍＬ，先泡３０ｍｉｎ，然后开 启加热，煮沸后计时６０ｍｉｎ；第二煎加水７００ｍＬ，煮 沸后计时４０ｍｉｎ。合并２次煎液，使用孔径为０．０４８ ｍｍ 的过滤材质，在药液热时进行过滤。将滤液用旋 转蒸发器于低温（５５℃，－０．０９５ＭＰａ）浓缩，浓缩至相 对密度为１．０３～１．０６（５５℃）的流浸膏，放置在不锈钢 盘中冷冻干燥，制成标准汤剂干燥粉末。

２．２ 标准汤剂中耐斯糖含量的测定

２．２．１ 色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相组 成水与甲醇体积比为９７∶３，采用蒸发光散射检 测 器 检 测，理论塔板数按耐斯糖峰计算应不低于 ３０００。

２．２．２ 对照品溶液的制备

取耐斯糖标准品适量，精 密 称 定，置 于 ５０ ｍＬ 容量瓶中，加入 流 动 相，制 成 每１ ｍＬ 含２００μｇ的溶液。

２．２．３ 供试品溶液的制备

取巴戟天 标 准 汤 剂０．２ｇ，精 密 称 定，置 于１５０ ｍＬ具塞锥形瓶 中，精 密 加 入 流 动 相５０ ｍＬ，称 重， 于沸水浴中加热３０ｍｉｎ，放冷，再次称重，用流动相 补足减失的质量，摇匀，过滤，即得。

２．２．４ 测定方法

精密吸 取 对 照 品 溶 液 １０μＬ、对 照 品 溶 液 ３０ μＬ、供试品溶液１０μＬ，注入液相色谱仪，测定，采用 外标两点法对数方程计算。

２．２．５ 线性关系考察

精密 吸 取 对 照 品 溶 液 ５．０，１０．０，２０．０，３０．０， ４０．０μＬ，按“２．２．１”所述条件进样分析，纵坐标为耐 斯糖峰面积的对数值，横坐标为耐斯糖进样量的对 数值，制 作 标 准 曲 线。结 果 表 明，耐斯糖进样量在 １．０４１９～８．３３４９ ｍｇ 范 围 内，回 归 方 程 为 Ｙ ＝ １．５８２９Ｘ＋５．５３３×１０－１，ｒ＝０．９９９７，表明线性关 系良好。

２．２．６ 精密度实验

取巴戟天标准汤剂样品（标３，下同），按“２．２．３” 所述方法制备供试品溶液，连续进样６针，测定峰面积（耐斯糖）的 ＲＳＤ 值 为 ０．８７％，结 果 表 明 精 密 度 良好。

２．２．７ 稳定性实验

取巴戟天标准汤剂样品，按“２．２．３”所述方法制 备供试品溶液，在１，３，６，１０，１４，１８ｈ进样测定耐斯 糖含量。经计算，各样品中耐斯糖峰面积的 ＲＳＤ 值 为１．５６％，说明１８ｈ内此样品溶液稳定。

２．２．８ 重复性实验

取巴 戟 天 标 准 汤 剂 样 品 供 试 品 ６ 份，每 份 ０．２ｇ，精密称定。按“２．２．３”所述方法处理标准汤剂 样品，按“２．２．１”所 述 条 件 进 样 测 定，计 算 供 试 品 中 耐斯糖含量。６份供试品中耐斯糖含量的 ＲＳＤ 值 为１．０５％，表明该方法重复性良好。

２．２．９ 加标回收实验

精密称取巴戟天标准汤剂样品，共计９份，每份 约０．１ｇ，每３份为一组。于每组中精密加入耐斯糖 对照 品 相 当 于 巴 戟 天 标 准 汤 剂 所 含 耐 斯 糖 量 的 ８０％，１００％，１２０％，置 于 具 塞 锥 形 瓶 中，按“２．２．１” 所述条件进样１０μＬ 进行测定，耐斯糖平均加标回 收率 为 １００．８０％，加 标 回 收 率 ＲＳＤ 值 为 １．５１％。 表明本方法的准确度良好。

３ 巴戟天标准汤剂特征图谱的建立

色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ公司 ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８ 柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈－０．０３％磷 酸 溶 液，按 表４比 例 进 行 梯 度 洗 脱；检 测 波 长：２３５ ｎｍ；流速：１ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；进样量：１０μＬ。精密 称 取 水 晶 兰 苷 对 照 品 １２．５ ｍｇ，置 于 ５０ ｍＬ量瓶中，加入２５％（体积分数，下同）甲醇定容， 制成每１ｍＬ 含水晶兰苷０．２５ｍｇ的对照 品 溶 液， 即得。取本品０．３ｇ，精 密 称 定，置于磨口三角瓶中。 精密量取２５％甲醇２５ｍＬ，加入三角瓶中，称重，密 塞，超声处理３０ｍｉｎ，放至室温后再次称定质量，用 ２５％甲醇补足减失的质量，摇匀，用０．４５μｍ 微孔滤 膜过 滤，即 得。取按“２．１”所 述 方 法 制 得 的 样 品，按 照“３．３”所 述方法制备样品溶液，分 别 进 样，按“３．１”色 谱 条 件 测定 ＨＰＬＣ图谱。测定 完 成 后，把１５批 ＨＰＬＣ 图 谱导 入 相 似 度 评 价 系 统 软 件 中 进 行 分 析。 １５批巴戟天标准汤剂共呈现７个共有特征峰，以２ 号峰水晶 兰 苷 为 参 照 峰，计 算 ７ 个 共 有 色 谱 峰 的 ＲＲＴ 及 ＲＰＡ。

４ 讨 论

４．１ 提取溶剂

在巴戟天配方标准汤剂特征图谱样品的制备方 法中，考察了纯化水、无水乙 醇、１００％甲 醇、７０％甲 醇、２５％甲醇、７０％乙醇、２０％乙醇共７种提取溶剂， 以色谱峰个数、基线稳定性等为考察指标，最终确定 用２５％甲醇进行样品溶液的制备。

４．２ 流动相

在特征图谱条件摸索阶段，对有机相考察了甲 醇、乙腈，对 水 相 考 察 了 ０．１％ 磷 酸、０．１％ 冰 醋 酸、 ０．０３％磷酸及水对反应的影响情况。通过对比色谱 图发现，流动 相 为 乙 腈－０．０３％磷 酸 时，色 谱 图 基 线 平稳，色谱峰 分 离 良 好，因 此 选 用 乙 腈－０．０３％磷 酸 作为流动相。

４．３ 色谱柱及柱温

考察了ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８及ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ ＡＱ－Ｃ１８色谱柱，以 及 柱 温 为２５，３０，３５ ℃对 反 应 的 影响情况。结 果 显 示，采 用 ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓ Ｃ１８色谱柱、柱温为３０ ℃时的效果最优。

４．４ 提取用纯化水、饮用水

先后考察了采用符合《中华人民共和国药典》要 求的纯化水、饮用水提取时的差异情况。从实验结 果可以看出，提取效果受提取用水的影响也较小。