胃溃疡寒证模型大鼠交感神经分析-精宏培养箱的

高良姜、大高良姜、红豆蔻、草豆蔻、益智均为姜科 山姜属（Alpinia）中药，其中高良姜为高良姜（Alpinia officinarum Hance）的干燥根，大高良姜、红豆蔻分别为大 高良姜（Alpinia galangal Willd.）的干燥根茎和果实，草 豆蔻为草豆蔻（Alpinia katsumadai Hayata）的干燥近成 熟种子，益智为益智（Alpiniae oxyphylla Miq.）的干燥成 熟果实。这5味中药的植物亲缘关系密切，皆收载于《中 华本草》，且高良姜、红豆蔻、草豆蔻、益智收载于2015 年版《中国药典》（一部）。

1 材料

1.1 仪器

Epoch 型全自动酶标仪（美国 BioTek 公司）；DNP9162型电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）； HVE-50型自动高压灭菌器（日本Hirayama公司）；PGL16型冷冻离心机（湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司）。

1.2 药材、药品与试剂

知母、高良姜、大高良姜、红豆蔻、草豆蔻、益智饮片 （批号分别为 150601、160101、170912、160605、170801、 170718）均购自南宁生源中药饮片有限责任公司，经广 西中医药大学中药鉴定学教研室田慧教授鉴定为真品。 附子理中丸（阳性对照，北京同仁堂科技发展股份 有限公司制药厂，批号：15010241，规格：每 100 粒重 10 g）；西咪替丁片（阳性对照，广东华南药业集团有限公 司 ，批 号 ：150802，规 格 ：0.2 g）；17- 羟 皮 质 类 固 醇 （17-OHCS）、肾上腺素（A）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺 （DA）、促肾上腺皮质素（ACTH）、多巴胺-β-羟化酶 （D-β-H）试剂盒（上海酶联生物科技有限公司，批号分别 为 RA20057、RA20337、RA20557、RA20050、RA20014、 RA20218）；乙醇、乙酸乙酯等试剂均为分析纯，水为蒸 馏水。

1.3 动物

SPF 级 SD 大鼠，雄性，6～7 周龄，体质量 180～220 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物生产许 可证号：SCXK（湘）2013-0004。

2 方法

2.1 药液的制备

2.1.1 造模药液

称取知母饮片适量，用10倍量（g/L， 下同）水充分浸泡 60 min，武火煮沸后转文火煎煮 1 h， 滤过，残渣用8倍量水煎煮40 min，滤过，合并两次滤液， 浓缩，即得质量浓度为0.5 g/mL（以生药量计）的知母水 煎液，于4 ℃冰箱中保存，备用；临用前，用4 ℃水稀释至 相应剂量。取冰醋酸 75 mL，用水稀释至 500 mL，得 15％冰醋酸溶液，于4 ℃冰箱中保存，备用。

2.1.2 受试药液

分别取高良姜、大高良姜、红豆蔻、草 豆蔻、益智饮片适量，粉碎成粗粉，首先用 10 倍量 95％ 乙醇回流提取2 h，滤过，收集滤液；残渣用8倍量95％乙 醇回流提取2 h，滤过，收集滤液；残渣再依次用10、8、8 倍量5％乙醇回流提取3次，每次2 h，滤过，收集滤液；合 并上述滤液，减压、低温挥去乙醇，即得到各药材浸膏 [得率分别为 16.94％、9.97％、12.74％、15.73％、12.39％ （质量百分比，下同）]。取上述浸膏，依次用石油醚、乙 酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次5 000 mL，合并相同萃取 部位，减压浓缩，即得各药材不同极性萃取部位（即石油 醚、乙酸乙酯、正丁醇、水）浸膏[得率分别为 2.56％、 2.54％、2.15％、4.75％（高良姜），1.58％、5.25％、3.41％、 1.44％（大高良姜），0.27％、6.24％、3.16％、1.04％（红豆 蔻），2.99％、2.56％、8.18％、2.12％（草豆蔻），2.64％、 3.12％、8.21％、2.13％（益智）]，于 4 ℃冰箱中保存，备 用。临用前，用 0.5％羧甲基纤维素钠溶液稀释至相应 剂量。

2.1.3 阳性对照药液

取附子理中丸、西咪替丁片各适 量，粉碎，用水溶解后，再用 0.5％羧甲基纤维素钠溶液 稀释至相应剂量，备用。

2.2 造模、分组与给药

所有大鼠均适应性饲养3 d后，随机取10只作为空 白组，灌胃等容常温水；其余大鼠均于每日上午8点灌胃 4 ℃知母水煎液（10.44 g/kg）、下午 18 点灌胃 4 ℃ 15％ 冰醋酸溶液（1 mL），连续4 d，以复制胃溃疡寒证大鼠模 型。造模结束后，将其随机分为模型组、附子理中丸组 （阳性对照，9.0 g/kg，剂量根据临床成人用药剂量的上限 换算而得）、西咪替丁组（阳性对照，0.003 3 g/kg，剂量根 据临床成人用药剂量的上限换算而得）以及高良姜、大 高良姜、红豆蔻、草豆蔻、益智的石油醚、乙酸乙酯、正丁 醇、水萃取部位低、高剂量组[以下简称“高石低/高”“大 石低/高”“红石低/高”“草石低/高”“益石低/高”“高乙低/ 高”“大乙低/高”“红乙低/高”“草乙低/高”“益乙低/高”“高正低/高”“大正低/高”“红正低/高”“草正低/高”“益正 低/高”“高水低/高”“大水低/高”“红水低/高”“草水低/ 高”“益水低/高”，剂量分别为 0.064/0.256、0.032/0.128、 0.008/0.032、0.075/0.3、0.1/0.4、0.064/0.256、0.108/0.432、 0.16/0.64、0.064/0.25、0.125/0.5、0.056/0.224、0.108/0.432、 0.08/0.32、0.2/0.8、0.3/1.2、0.14/0.56、0.032/0.128、0.028/ 0.112、0.05/0.2、0.087/0.348 g/kg，以萃取部位质量计；剂 量根据《中华本草》和2015年版《中国药典》（一部） 规定 的成人用药剂量的上限并结合前期预实验结果换算而 得]，每组10只。造模次日，空白组和模型组大鼠均灌胃 等容常温水，各给药组大鼠灌胃相应药液，给药体积均为 2 mL/100 g，每12 h给药1次，共给药4次。

3 结果

与空白组比较，模型组大鼠尿液17-OHCS、A、NE、 DA以及血清ACTH、D-β-H含量均显著降低，差异均有 统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，不同给药组大 鼠尿液17-OHCS（附子理中丸组、西咪替丁组以及高石 低/高、大石高、红石高、草石高、益石高组）、A（附子理中 丸组、西咪替丁组以及高石高、大石高、红石低/高、草石 低/高、益石高组）、NE（各给药组）、DA（除高石低组外的 其余各给药组）以及血清 ACTH（附子理中丸组以及高 石高、大石高、红石低/高、草石高、益石低/高组）、D-β-H （附子理中丸组以及高石高、大石高、红石低/高、益石高 组）含量均显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05或 P＜0.01）；且大石高组17-OHCS、D-β-H含量，草石高组 ACTH、D-β-H含量以及高石高、益石高组D-β-H含量均 显著低于红石高组，差异均有统计学意义（P＜0.01 或 P＜0.05），详见表1。

与空白组比较，模型组大鼠尿液17-OHCS、A、NE、 DA以及血清ACTH、D-β-H含量均显著降低，差异均有 统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，不同给药组大 鼠尿液17-OHCS（各给药组）、A（各给药组）、NE（各给药 组）、DA（各给药组）、ACTH（除西咪替丁、大乙低、红乙 低组外的其余各给药组）以及血清D-β-H（除西咪替丁、 大乙低、红乙低、益乙低组外的其余各给药组），差异均 有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；且高乙高、草乙高、 益乙高组DA含量以及高乙高、红乙高、草乙高、益乙高 组 D-β-H 含量均显著低于大乙高组，高乙高、草乙高组 DA含量均显著低于红乙高组，高乙高、大乙高、草乙高、 益乙高组ACTH含量均显著高于红乙高组，差异均有统 计学意义（P＜0.05或P＜0.01)。与空白组比较，模型组大鼠尿液17-OHCS、A、NE、 DA以及血清ACTH、D-β-H含量均显著降低，差异均有 统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，不同给药组大 鼠尿液17-OHCS（附子理中丸、西咪替丁组以及高水高、 大水高、红水高组）、A（附子理中丸、西咪替丁组以及红 水高组）、NE（附子理中丸、西咪替丁组以及高水高、大 水高、红水高组）、DA（附子理中丸、西咪替丁组以及红 水高组）以及血清 ACTH（附子理中丸组以及大水高 组）、D-β-H（附子理中丸组以及红水高组）含量均显著升 高，差异均有统计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01）；且草水 高、益水高组 17-OHCS、D-β-H 含量均显著低于大水高 组；草水高、益水高组17-OHCS、DA、D-β-H含量和高水 高组 DA、D-β-H 含量均显著低于红水高组（P＜0.05 或 P＜0.01）。

4 讨论

山姜属为姜科一大属，全世界约有植物 250 种，主 要分布于亚洲热带地区，我国有 46 种，广西是主产地 之一。该属植物药用历史悠久，是具有重要临床应用 价值的常用中药，也是广西大宗特产药材。本课题组前 期研究发现，高良姜、大高良姜、山姜、艳山姜、益智、红 豆蔻、草豆蔻、小草蔻、建砂仁、箭杆风等山姜属中药均 含有γ-杜松烯、γ-萜品烯、芳樟醇、莰烯、石竹素、4-萜烯 醇、1，1，4，8-四甲基-4，7，10-环十一三烯等挥发性成分， 并初步推测上述成分可能也是上述中药具辛香气味的 重要物质基础。同时药理研究结果显示，高良姜、大高 良姜、红豆蔻、草豆蔻、益智等5味山姜属中药石油醚及 乙酸乙酯部位（高剂量）均可通过提高大鼠胃组织中腺 苷环化酶（AC）、cAMP含量以及cAMP/cGMP，降低PDE 含量等途径来发挥对胃溃疡寒证模型大鼠的治疗作用。本研究在药用植物亲缘关系的基础上，以胃溃疡 寒证模型大鼠为对象，以附子理中丸、西咪替丁（胃溃疡 寒证为胃实寒证，临床上常以附子理中丸治疗胃寒证， 以西咪替丁等治疗胃溃疡）为阳性对照，初步考察了上 述5味中药通过调节交感神经-肾上腺系统机能对模型 大鼠的改善作用。